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 viraggio terreno RPMI : cause
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todo84
Nuovo Arrivato



3 Messaggi

Inserito il - 11 gennaio 2011 : 21:32:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di todo84 Invia a todo84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti...sono nuova del forum..e avrei bisogno di aiuto..da un po' di tempo nel nostro laboratorio stiamo avendo problemi con la coltura cellulare di monociti.il fatto è semplice..il terreno che utilizziamo, RPMI-1640, vira di colore (tende al fucsia) dopo solo 1 ora dalla piastratura, compromettendo cosi la vitalità cellulare!! abbiamo provato di ogni..cambiato lotto e ditta del terreno, cambiato gli antibiotici/antimicotici, e persino cambiato o tolto il tampone (usiamo l'Hepes). Abbiamo provato a cambiare anche tutta la plasticheria (falcon, flasche, piastre..)L'incubatore è nuovissimo (cambiato da poco!!) e la CO2 è stabile al 5%. Se qualcuno ha avuto lo stesso problema e sa come risoverlo o almeno suggerisce che cosa provare d'altro per capire..scriva pure!!!ogni ripsosta è ben gradita!!!
Grazie mille!

Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 11 gennaio 2011 : 22:29:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
a me sembra proprio mancanza di CO2. cosa dice la bombola?
prova a mettere mezzo senza cellule nel tuo incubatore e controlla il colore dopo un po' e prova a mettere le colture in un incubatore di un lab vicino.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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todo84
Nuovo Arrivato



3 Messaggi

Inserito il - 11 gennaio 2011 : 23:11:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di todo84 Invia a todo84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
..la bombola è a posto..già controllato..e il terreno vira anche senza cellule!!!.....ti viene in mente altro??...grazie mille davvero cmq!!!
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domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi

Inserito il - 11 gennaio 2011 : 23:40:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La CO2 è stabile perchè lo dice l'incubatore? è tarato? Esiste uno strumento per misurare la CO2 negli incubatori (non so come si chiama), forse dovreste provare...

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 12 gennaio 2011 : 10:39:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
esatto, quello che intendevo dire te lo ha spiegato meglio domi84. metti terreno con e senza cellule anche in un altro incubatore.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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todo84
Nuovo Arrivato



3 Messaggi

Inserito il - 12 gennaio 2011 : 14:01:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di todo84 Invia a todo84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
..vira anche in un altro incubatore.....
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Martin.diagnostica
Utente Attivo

H. pylori



1582 Messaggi

Inserito il - 12 gennaio 2011 : 16:56:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Martin.diagnostica Invia a Martin.diagnostica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
il viraggio è dovuto ad un cambio del pH del mezzo, il colore è dato dal Phenol Red Sodium Salt. Quindi se mai il tampone lo dovete aggiungere non diminuire. Provate a anche ad aumentare o cambiare lotto del siero o a piastrare meno cellule
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 12 gennaio 2011 : 17:07:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Prendi del terreno senza siero, senza cellule, insomma senza aggiungerci nulla. Vira anche così?

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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 12 gennaio 2011 : 17:57:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da chick80

Prendi del terreno senza siero, senza cellule, insomma senza aggiungerci nulla. Vira anche così?


Citazione:
Messaggio inserito da todo84

..la bombola è a posto..già controllato..e il terreno vira anche senza cellule!!!.....ti viene in mente altro??...grazie mille davvero cmq!!!



Se vira anche senza cellule il problema è del terreno. L'incubatore lo escluderei visto che hai provato anche un altro incubatore.
Concordo con Martin.diagnostica, il viraggio è dato da un cambiamento del pH, misura il pH prima e poi fai delle prove con il terreno senza cellule con o senza i vari componenti (siero, antibiotici...) e rimisura il pH per vedere cosa ti dà problemi.
Ideale comunque sarebbe anche assicurarsi che la CO2 sia realmente 5% negli incubatori che usi.
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Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 12 gennaio 2011 : 21:15:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
prova anche così: metti un po' di mezzo in falcon e misura il pH. poi metti un po' di mezzo in altre due falcon, in una delle due aggiungi Hepes pH7.4 2mM e metti entrambi i falcon in incubatore. Dopo una decina di minuti misura il pH del mezzo con e senza hepes e controlla se ci sono stati cambiamenti.

ps: ovviamente le cellule ti muoiono, giusto?

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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Martin.diagnostica
Utente Attivo

H. pylori



1582 Messaggi

Inserito il - 13 gennaio 2011 : 01:12:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Martin.diagnostica Invia a Martin.diagnostica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Oppure fatti prestare una bottiglia di RPMI da un altro laboratorio (già preparato ovviamente) e vedi se le cellule apprezzano!!!!
Posta esattamente il protocollo che esegui per preparare il siero e le linee cellulari che hai in cultura.
Una curiosità hai scomplementato il siero che aggiungi al mezzo
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