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 elettroforesi su gel di agarosio
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eleskin
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Inserito il - 13 gennaio 2011 : 10:15:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di eleskin Invia a eleskin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti, volevo chiedervi una cosa,ed è anche molto urgente :-)
sapreste spiegarmi quali potrebbero essere le cause di una difformità del gel di agarosio?mi spiego meglio, ieri ho fatto un gel,e non è di certo il primo che faccio, solo che dopo aver caricato i pozzetti e acceso il voltaggio (150 V) già dopo pochi minuti mi sono accorta che le bande si muovevano non in modo uniforme ma facevano come un arco, una sorta di arcobaleno,ovviamente ho aspettato quasi due ore e il risultato è stato un arco perfetto :-) ovviamente inutilizzabile dato che dovevo calcolare le bande per i miei RAPD. Grazie

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


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Inserito il - 13 gennaio 2011 : 10:20:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Potrebbe essere il tampone. Controlla il pH o fallo direttamente nuovo.

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eleskin
Nuovo Arrivato



11 Messaggi

Inserito il - 13 gennaio 2011 : 10:23:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di eleskin Invia a eleskin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ok lo farö grazie tante :-)
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eleskin
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11 Messaggi

Inserito il - 13 gennaio 2011 : 10:37:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di eleskin Invia a eleskin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
controllato il ph, è 8.5 come segnato dalla confezione....per cui direi che non è questo il problema...
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 13 gennaio 2011 : 12:53:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ma è stato fatto di recente? Dopo un tot di corse è meglio cambiarlo.
Altra cosa: controlla che gli elettrodi della vaschetta non siano sporchi (es. pezzi di gel che sono rimasti "incagliati" attorno).

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eleskin
Nuovo Arrivato



11 Messaggi

Inserito il - 13 gennaio 2011 : 13:56:59  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di eleskin Invia a eleskin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si credo che il problema stava nel voltaggio e negli elettrodi, credo e spero di aver risolto, un'altra cosa tu in una cella elettroforetica di 15x15 quanto gel inserisci? usando una percentuale di agarosio del 1,5%.
grazie
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 13 gennaio 2011 : 14:44:59  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
hmmmm... è qualche anno che non faccio più gel... passo la domanda a qualcun altro.

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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 13 gennaio 2011 : 16:44:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Dipende da quanto lo vuoi fare spesso il gel, comunque indicativamente per un 15x15 intorno ai 100-120ml dovrebbe andare bene.
Ovviamente l'agarosio lo pesi in base al volume finale, se non sei sicura fanne di più e non versarlo tutto, vedi quanto ce ne sta in modo che il gel non sia troppo spesso ma lo sia abbastanza perché si formino i pozzetti.
Il conto comunque è banale, devi formare un "parallelepipedo rettangolo", quindi il volume sarà: base x altezza x spessore
anche se ovviamente il gel non occupa lo stesso volume dell'acqua puoi approssimare, quindi:
15 x 15 x 0,5 = 112,5
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eleskin
Nuovo Arrivato



11 Messaggi

Inserito il - 13 gennaio 2011 : 17:35:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di eleskin Invia a eleskin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ok grazie mille
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