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nannuto
Nuovo Arrivato
33 Messaggi |
 Inserito il - 17 gennaio 2011 : 12:31:20
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Qualcuno di voi ha mai fatto un coating di fibronectina sul supporto (fiasche, petri, vetrino) prima di piastrarvi sopra le cellule? se sì con quali risultati in termini di adesione cellulare, distacco con tripsina ed osservazine al microscopio? e se posso chiedervelo, perchè avete adottato tale procedura? grazie!
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 17 gennaio 2011 : 21:19:08
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| io lo faccio (quasi) quotidianamente. in genere faccio il coating dei vetrini per favorire l'adesione cellulare. in pratica, lavorando con le cellule in mitosi che si staccano molto facilmente manipolando i vetrini, ho bisogno di un supporto che ne potenzi l'adesione. al microscopio, per i miei esperimenti, non mi cambia nulla che ci sia o meno il coating. tu hai qualche problema? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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nannuto
Nuovo Arrivato
33 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2011 : 11:00:37
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| in realtà io non ho ancora cominciato a fare il coating con fibronectina perchè finora avevo sempre usato la polilisina, la quale però mi dava problemi di background quando andavo ad osservare al microscopio, per cui ho deciso di cambiare sostanza, anche perchè, lavorando con dei fibroblasti, la fibronectina credo sia più appropriata. Qual è il protocollo che tu segui e la concentrazione che impieghi nel fare il coating? grazie 1000! |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 20 gennaio 2011 : 11:27:13
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per il coating io la uso 10ug/ml. Preparo degli stock 10X di 5 ml dalla polvere che poi aliquoto e congelo. Mi diluisco gli stock per preparare 50 ml di fibronectina pronta all'uso che poi ulteriormente aliquoto e congelo. Dagli stock 10X, la diluizione va fatta in PBS completo, quindi: 5ml PBS 10X, CaCl2 900uM, MgCl2 500uM, 5ml di fibronectina 100ug/ml , a volume finale di 50 ml con H2O.
una volta pronta metto 15 ul su piastra e ci capovolgo sopra un vetrino. Lascio il vetrino capovolto per circa 20 minuti, poi lo risollevo e lo metto nel pozzetto. Una volta scongelata un'aliquota, la tengo in uso al massimo 10 gg.  |
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coating con fibronectina
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