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Autore

Discussione

Adriel
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2011 : 15:16:45

Ciao a tutti...sto scrivendo una relazione relativa alla ligazione e trasformazione di cellule di E.coli..in laboratorio il risultato non è stato ottimale in quanto nelle piastre non sono cresciute colonie, nè in quella di 1/10 nè in quella di 9/10...dovrei spiegarne la motivazione..quali potrebbero essere i motivi di questo insuccesso?

_ARY_
Nuovo Arrivato

Prov.: mi
Città: milano

81 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2011 : 15:37:39

ciao,anche a me è successo :(
la spiegazione potrebbe essere che il tuo vettore di clonaggio non è stato assunto da nessuna cellula batterica.
Nel vettore c'è un gene per la resistenza ad esmpio ampicillina,quindi per sapere se le cellule hanno il vettore le fai crescere in un terreno selettivo. A questo punto le cellule con il vettore crescono (perchè esprimono il gene della resistenza) le cellule senza vettore muoiono.
quindi, se non hai cellule significa che il tuo plasmide non è stato acquisito, magari durante la ligazione qualcosa è andato storto!

spero di esserti stata utile^^

Adriel
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2011 : 16:10:31

assolutamente sì!gentilissim davvero!!!!!! grazie!!!! :)

Patrizio
Moderatore

Città: Barcellona

1912 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2011 : 16:45:28

di che la ligasi non funzionava e prima di fare la trasformazioni accertati che la ligazione sia avvenuta facendo una PCR con 0,5 ul di reazione di ligazione usando un primier nell'inserto ed uno sul vettore