Forum

Nome Utente:
Password:
Riconoscimi automaticamente
 Tutti i Forum
 Laboratorio
 Biologia Molecolare
 come scegliere due primers?esame
 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
I seguenti utenti stanno leggendo questo Forum Qui c'č:

Aggiungi Tag Aggiungi i tag

Quanto č utile/interessante questa discussione:

Autore Discussione  

ica88
Nuovo Arrivato



4 Messaggi

Inserito il - 16 febbraio 2011 : 14:26:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ica88 Invia a ica88 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
buongiorno a tutti,devo sostenere un esame di biologia molecolare e non riesco a risolvere un esercizio...mi viene data una sequenza di cDNA a doppio filamento con le 3 traduzioni possibili ,tra queste individuo l'ORF..premetto che non ho la possibilitā di utilizzare database informatici...il mio problema č che non so come identificare queste sequenze da utilizzare come primers, quale criterio utilizzare??grazie a tutti

Ale_90
Utente Junior



296 Messaggi

Inserito il - 16 febbraio 2011 : 15:15:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ale_90 Invia a Ale_90 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per quale motivo devi amplificare questo cDNA? Se dovessi amplificarlo per poi clonarlo in un vettore di espressione, dovresti cercare un codon di inizio (ATG) e disegnare il forward primer in quella zona; per il reverse primer valuta tu, dipende da quanto č lungo questo cDNA e sempre dal motivo per cui devi amplificarlo....

Spero di essere stato chiaro :)


Torna all'inizio della Pagina

ica88
Nuovo Arrivato



4 Messaggi

Inserito il - 16 febbraio 2011 : 17:01:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ica88 Invia a ica88 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
allora il cDNA č lungo circa 600pb, lo devo anplificare per clonarlo in vettore di espressione pGEX usando il sito sma1..per il primer forward sei stato molto chiaro grazie..mentre per il reverse in che modo posso valutarlo??oltre ad assicurarmi che non abbia parti complementari al forward primer??
Torna all'inizio della Pagina

Ale_90
Utente Junior



296 Messaggi

Inserito il - 16 febbraio 2011 : 22:32:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ale_90 Invia a Ale_90 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se devi tagliarlo con SmaI, cerca se hai un altro sito di restrizione al fondo del cDNA; se cosė fosse, potresti disegnare il reverse primer in quella zona...
Torna all'inizio della Pagina

0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 16 febbraio 2011 : 22:48:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Possibilmente mai tagliare all'interno del DNA, meglio inserire i siti di restrizione con adattatori, linker o per l'appunto con PCR.
Torna all'inizio della Pagina

Ale_90
Utente Junior



296 Messaggi

Inserito il - 17 febbraio 2011 : 11:40:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ale_90 Invia a Ale_90 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Quindi dici di disegnare il reverse primer con una sequenza āncora contenente un sito SmaI? Poi disegni il primer sulla zona finale della sequenza codificante e cosė hai il cDNA bello che pronto per il clonaggio?
Torna all'inizio della Pagina

0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 17 febbraio 2011 : 14:06:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si, o visto che si parlava di espressione sarebbe ancora meglio diversificare i due primer per taglio con due diversi enzimi di restrizione.
Torna all'inizio della Pagina
  Discussione  

Quanto č utile/interessante questa discussione:

 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
Vai a:
MolecularLab.it © 2003-18 MolecularLab.it Torna all'inizio della Pagina