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Piccolastella
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 Inserito il - 20 febbraio 2011 : 21:02:46
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Dipende cosa devi quantificare. Solitamente la quantificazione assoluta la si utilizza per quantificare patogeni presenti in un campione, come acidi nucleici di virus o batteri. In questo caso si utilizzano standard di riferimento quantificati con un altro sistema, o standard quantificati che si comprano come tali.
Altrimenti si utilizza un campione che tu sai essere positivo, che viene diluito a diluizioni seriali 1:10. L'analisi deve essere fatta con almeno 3 repliche per ogni punto. Visto che la PCR real time è sensibilissima, per convenzione si considera che il campione in cui vedi la prima positività (probabilmente su 3 campioni non li vedrai tutti positivi) contiene 1 copia di virus. E così determini le quantità di virus in tutti i punti della tua curva standard.
Se invece la real time quantitativa la usi per analisi su DNA genomico, anche in quel caso puoi costruirti degli standard ad hoc, ma il discorso è molto differente, e più complesso. |
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Real Time PCR assoluta
Didattica
