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patty82
Nuovo Arrivato

31 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2011 : 10:41:59

Buongiorno ragazzi mi � venuto un dubbio: quante ore dure l'overnight?
Perch� devo digerire del DNA genomico con due enzimi di restrizione (HpaII e HhaI)che devono lavorare overnight e a volte, con alcuni DNA, non riesco a digerire. Io li tengo 16 ore e 30 minuti ma a questo punto mi viene il dubbio che sia troppo poco.
Mi sapete aiutare?

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1915 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2011 : 11:39:25

mi viene da chiederti perch� devi fare ci�, controlla se questi enzimi hanno dei limiti sul genomico

SpemannOrganizer
Utente

Citt�: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2011 : 11:47:48

Ciao anche io ho fatto delle digestioni di genomico overnight, per fare delle linker-mediated pcr. 16 ore dovrebbero essere sufficienti, tuttavia anche io non sempre osservo una completa digestione del DNA. Quanto DNA metti nella digestione? Forse se diminuisci un po' la quantit� di DNA?

patty82
Nuovo Arrivato

31 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2011 : 13:42:48

Allora inizialmente usavo 25 ng di DNA, poi per alcuni motivi ho aumentato drasticamente a 250 ng ma il porblema l'ho adesso come l'avevo prima....

SpemannOrganizer
Utente

Citt�: Los Angeles

955 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2011 : 14:15:56

uhm dunque nn � quello il problema... domanda, non � che ti si son scassati semplicemente gli enzimi? hai provato a fare delle digestioni di prova con controlli positivi (plasmidi con i siti di restrizione richiesti)?