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baberta
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 08 marzo 2011 : 16:29:07
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ciaooo a tutti!!! spero che qualcuno mi possa aiutare... sto impazzendo con questi fegati... li ho inclusi in oct e congelati direttamente nei vapori di azoto liquido ma tagliandoli si rompono tutti!!! come devo fare?? qualcuno include in oct fissando prima in paf o formalina???mi vengono sempre dei vetrini orrendi con una morfologia pessima!!!
help!!!!
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
 Inserito il - 08 marzo 2011 : 17:09:08
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| Ciao, io nn fisso fegati ma embrioni di Xenopus. Il primo passaggio per me è la fissazione in PFA (paraformaldeide) 4%. Fisso minimo un'ora, ma dipende anche dalla grandezza e quindi stadio dell'embrione. Generalmente una fissazione over night a 4°C è piu' che buona per quello che mi serve fare. Poi subito dopo lavaggi in pbs e incubazione in Saccarosio 30% per almeno 3 ore a RT (anche questo a volte lo faccio O.N. a 4°C). OCT:tolgo tutto il saccarosio e metto l'OCT. Non congelo gli embrioni usando vapori di azoto ma una piastra raffreddata sopra al ghiaccio secco(ce li tengo una mezz'oretta minimo). Tieni conto che dopo questa procedura di congelamento, puoi mettere il tuo campione (almeno nel caso degli embrioni) a -80 e tagliare qualche giorno dopo. pero' piu' tempo aspetti piu' l'istologia sarà deteriorata. L'ideale è tagliare il giorno stesso o il giorno dopo.Un altro fattore che influenza il taglio, o meglio la qualità dell'istologia del tuo tessuto, è ovviamente la T del criostato.Se non è ben stabile questo ti dannaggia il tessuto. Se vedi che la T possa essere il problema, fermati e continua a tagliae solo quando si sarà riassestata. |
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baberta
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 08 marzo 2011 : 17:29:25
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oook!! grazie mille!!!! farò anche questo allora...tanto le sto provando tutte!!! gtrazie ancora! |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 08 marzo 2011 : 17:30:45
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facci sapere :)
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 08 marzo 2011 : 23:05:45
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io ho congelato sia con ghiaccio secco e con azoto e tra i due mi va meglio l'azoto, però oltre a far congelare nei vapori, immergi il fegato un po' in azoto fino a quando smette di sfrigolare, così il congelamento sarà più uniforme.
elly_ |
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n/a
deleted
1123 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2011 : 18:54:25
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Metti un po' di OCT sulla formella, mettici il tuo pezzettino e ricoprilo con abbondante OCT.
Poi immergilo nell'azoto moooolto lentamente e gradualmente, non solo nei vapori ma proprio nel liquido..
Ma davvero molto lentamente un po' alla volta.
Quando smette di "friggere" è pronto, circa 10-15 secondi.
Con le biopsie epatiche non ho avuto problemi, l'importante è appunto che non si creino "buchi" nell'OCT congelato altrimenti giustamente si taglia di cacca.
Buona fortuna.
PS: ma l'OCT non è fatto appositamente per evitarsi la manfrina della fissazione in formalina di un giorno? Se comunque lo si mette in formalina overnight non è meglio la classica inclusione in paraffina che mantiene meglio la morfologia cellulare non creando artefatti dovuti al congelamento? 
Io ho sempre saputo così.. |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2011 : 19:23:05
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Citazione:
Messaggio inserito da Pincopallina
PS: ma l'OCT non è fatto appositamente per evitarsi la manfrina della fissazione in formalina di un giorno? Se comunque lo si mette in formalina overnight non è meglio la classica inclusione in paraffina che mantiene meglio la morfologia cellulare non creando artefatti dovuti al congelamento?
Io ho sempre saputo così..
Bella domanda. Sinceramente io personalmente non so cosa dire. Noi gli embrioni li fissiamo e da questo dipende molto la qualità del tessuto. Tieni conto che fissiamo in PFA (paraformaldeide 4%)e solitamente è meglio farlo over night.
L'OCT di per se non è un fissativo quindi immagino che qualunque sia il tipo di fissativo, in qualche modo il tessuto lo devi fissare. |
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n/a
deleted
1123 Messaggi |
Inserito il - 09 marzo 2011 : 19:42:08
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Si l'OCT ha la stessa funzione della paraffina, ovvero includere per poter tagliare le sezioni quindi non è di per se un fissativo.
Io ho sempre saputo che con l'OCT si potessero includere i preparati "a fresco" e basta, quindi senza dover fissare nulla precedentemente..Ma evidentemente sbagliavo se voi fissate e poi includete in OCT.
Non si finisce mai di imparare  |
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inclusione fegati in oct
Didattica e Relazioni
