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a.diana
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
 Inserito il - 09 marzo 2011 : 15:50:10
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ciao ragazzi pioche sto studiando i diversi tipi di leucemie....volevo sapere con quale tipo di pcr posso vedere mutazioni puntiforme e traslocazioni...
help!
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Pipps
Utente Junior
244 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2011 : 14:16:00
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Sicuramente la Nested PCR, che è un tipo di PCR molto specifica, che aumenta notevolmente il tasso di amplificazione e che permette di amplificare frammenti presenti in concentrazioni molto basse.
Viene usata nella sorveglianza di recidive in casi di leucemie. Un esempio è la leucemia mieloide cronica, in cui avviene una traslocazione reciproca tra i cromosomi 9 e 22, con formazione di un gene di fusione bcr-abl. Se non sbaglio il marcatore genetico caratteristico di questa leucemia è detto cromosoma Philadelphia. Se avviene fusione genica allora si osserverà presenza di una banda, altrimenti i due primer si legherebbero a target scollegati e quindi non si osserverebbe niente.
Le ASO-PCR sono invece utilizzate per verificare la presenza di una mutazione puntiforme, o cmq qualsiasi singolo polimorfismo, in quanto si utilizzano coppie di primer che differiscono per una singola base su un solo primer (ad es. il forward). Solo se c'è complementarietà totale allora la reazione avrà successo, altrimenti, nel caso dellla mutazione, si avrà spaiamento della pol e blocco della reazione. |
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a.diana
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
Inserito il - 10 marzo 2011 : 22:09:17
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 grazie mille..quindi nested pcr per traslocazioni come 9-22(comunque si ricordi bene il cr. viene chiamato cr.ph)in cui utilizzo una coppia di primer x la prima amplificazione...e poi x la seconda utilizzo come stampo il prodotto della prima amplificazione giusto?
vantaggi: più sens.
ottima qnd è poco lo stampo di inizio!
..poi x mutazioni puntiformi io sapevo ke bisogna utilizzare la pcr amrs......
????vero?? |
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Pipps
Utente Junior
244 Messaggi |
Inserito il - 11 marzo 2011 : 10:16:10
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sì, la nested funzioni come hai detto tu, sono praticamente due reazioni di pcr una dentro l'altra.
Per le mutazioni puntiformi puoi usare anche la ARMS, che è molto simile alla ASO dato che vengono modificate l'ultima e la penultima base del primer (nella ASO è cambiata solo l'ultima), quindi in questo modo si aumenta ancora di più la specificità allelica.
Credo che entrambe possono essere usate nello studio delle mutaz. puntiformi!
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PCR per leucemie
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