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mollichina di pane
Utente Junior

Miyu


121 Messaggi

Inserito il - 23 marzo 2011 : 18:08:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mollichina di pane Invia a mollichina di pane un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!
Avrei bisogno di un aiuto...
...devo fare un western blot su frazioni cellulari (citoplasma-nucleo) per verificare la localizzazione della proteina d'interesse. Per questo motivo ho un controllo per il citoplasma ed uno per il nucleo.
Purtroppo non ho un protocollo che mi spieghi come si fa questo tipo di western. Mi spiego meglio: per es. per la frazione citoplasmatica avrò un anticorpo per il controllo ed uno per la prot. d'interesse. Vanno usati insieme? oppure bisogna "strippare"?
Qualcuno di voi mi sa indicare un protocollo o un articolo?
Grazie mille!!!

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 23 marzo 2011 : 18:39:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
dipende. se le due bande sono sufficientemente distanti puoi tagliare la membrana e non hai bisogno di strippare.

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theBiochemist
Nuovo Arrivato

Io e Lucia

Prov.: UK
Città: Leicester


14 Messaggi

Inserito il - 24 marzo 2011 : 02:56:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di theBiochemist Invia a theBiochemist un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se avete l'Odyssey, puoi utilizzare piu' anticorpi allo stesso momento senza tagliare o strippare. Io ne ho messi 4 al massimo, ma ho visto farlo con 8.

http://www.icmb.utexas.edu/core/DNA/Information_Sheets/Odyssey/Western_07737.pdf

http://www.icmb.utexas.edu/core/DNA/Imaging/Odyssey.htm
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Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 24 marzo 2011 : 10:36:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
curiosità: che marcatore di nucleo usi?

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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mollichina di pane
Utente Junior

Miyu



121 Messaggi

Inserito il - 29 marzo 2011 : 11:46:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mollichina di pane Invia a mollichina di pane un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie a tutti!
Proverò la via più semplice di chick80 e nel frattempo ho scovato un articolo carino (richiesto in biblio perchè non è tra le riviste nella nostra rete)che magari proverò più in là sull'utilizzo di più Ab contemporaneamente.
Il marcatore per il nucleo?
o SNRP70 o nuclear marker-nuclear matrix protein p84
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ericuccia88
Nuovo Arrivato



19 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2011 : 21:45:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ericuccia88 Invia a ericuccia88 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!
sono nuova, mi sono iscritta oggi!!
Volevo chiedervi se potete suggerirmi un marcatore citoplasmatico per western blot su frazioni cellulari che non sia l'actina!
grazie!!
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knodel
Nuovo Arrivato



24 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2011 : 20:30:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di knodel Invia a knodel un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La GADPH!
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Daria85
Utente

aplisia



678 Messaggi

Inserito il - 16 dicembre 2011 : 09:48:25  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Daria85 Invia a Daria85 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
anche la tubulina se vuoi, pesa circa 55KDa
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pokypsi
Nuovo Arrivato



20 Messaggi

Inserito il - 20 dicembre 2011 : 13:18:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di pokypsi Invia a pokypsi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
in teoria se usi marcatori specifici il tuo marcatore citoplasmatico non dovresti averlo nel nucleo e viceversa. io di solito li faccio uno dopo l´altro, facendo quello prima nucleare che di solito é piú specifico eppoi quello citoplasmatico. Per esempio il GAPDH un pó va anche nel nucleo quindi é meglio farlo per secondo.
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