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mayra
Nuovo Arrivato

life


42 Messaggi

Inserito il - 06 aprile 2011 : 21:46:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mayra Invia a mayra un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti. sono alla mia prima esperienza di laboratorio ed è da tre settimane che provo a fare un saggio di vitalità cellulare ma non riesco.La dottoranda che mi segue mi dice che le cellule sono stressate perchè sono pochissime anche nel controllo.Infatti guardandole il giorno dopo si nota che non assumono la loro morfologia tipica(leggermente allungata) ma sono rotondeggianti.premesso che le stesse cellule vengono piastrate in egual numero da un'altra dottoranda e che quest'ultima non ha problemi, qualcuno saprebbe dirmi quali sono i possibili errori che poi portano le cellule ad essere stressate?

Dex
Nuovo Arrivato

Spiral

Città: Milano


12 Messaggi

Inserito il - 08 aprile 2011 : 20:29:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dex Invia a Dex un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Prima controlla che il medium sia giusto (sembra ovvio, ma alla fine sono tutti rosa...), e controlla tutte le componenti del medium, soprattutto siero e glucosio. Le piastre hanno un coating? Se le concentrazioni non sono giuste fanno fatica ad attaccarsi. Controlla i parametri dell'incubatore. Quado tripsinizzi le cellule, lasciale solo per il tempo necessario a farle staccare (spesso bastano 2 minuti a 37°C). Per staccare le cellule, o per togliere eventuali aggregati potresti dover spipettare un po': non esagerare, se no si stressano. E quando piastri non tenerle troppo tempo fuori dall'incubatore. Spero di esserti stato utile
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mayra
Nuovo Arrivato

life



42 Messaggi

Inserito il - 11 aprile 2011 : 18:04:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mayra Invia a mayra un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie per avermi risposta.In realtà queste sono tutte cose a cui sto attenta.L'ultimo piastramento è riuscito quindi credo dipenda anche dal tipo di cellula.Oggi ne ho piastrato una linea che si stacca difficilmente e si aggrega molto quindi per contarle devo cmq spipettarle bene...ed ho la vaga impressione che domani le troverò di nuovo stressate!Cmq scusa la mia ignoranza,ma che cosa è il coating?
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Dex
Nuovo Arrivato

Spiral

Città: Milano


12 Messaggi

Inserito il - 11 aprile 2011 : 19:40:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dex Invia a Dex un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Il coating è il pretrattamento che fai alle piastre per fare aderire meglio le cellule. Alcune linee lo richiedono se no non si attaccano o vedi che fanno fatica. In genere si usa poli-lisina, collagene o fibronectina. Ma mi pare di capire che nel tuo caso non sia necessario.
Probabilmente lo stress dipende anche da come si svegliano le cellule.
Magari sono a un passaggio elevato, oppure c'è qualche sordida contaminazione. Però hai detto che una tua collega non ha problemi. Di che linea cellulare si tratta?
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mayra
Nuovo Arrivato

life



42 Messaggi

Inserito il - 12 aprile 2011 : 18:32:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mayra Invia a mayra un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si tratta delle HT1376,sono di vescica.Questa mattina le ho trovate abbastanza bene.In realtà però ho utilizzato quelle della mia collega...questo potrebbe significare che magari le mie avevano avvertito il cambio stagione
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