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immetella
Nuovo Arrivato

Dory
Prov.: Pescara
Città: Pescara


32 Messaggi

Inserito il - 08 aprile 2011 : 11:49:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di immetella Invia a immetella un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!
Sono da poco arrivata in un nuovo lab ed il prof mi ha affidato un piccolo esperimento da fare...devo valutare l'espressione di un gene in alcune cellule trattate con una sostanza. In lab nessuno sa fare la Real Time PCR perciò abbiamo chiesto ad un lab vicino di inserire i nostri campioni nel loro esperimento (anche perchè loro hanno i primer per amplificare il gene umano mentre noi abbiamo solo quelli di ratto).
Io quindi dovrei fare solo la RT PCR per retrotrascrivere l'RNA estratto dalle cellule in cDNA da dare a loro.
La domanda è:
Quale tipo di RT PCR devo fare? Cioè sulla sheet della retrotrascrittasi c'è scritto che posso sia retro trascrivere solo un filamento che entrambi...quel protocollo devo seguire?
Vi ringrazio in anticipo :) so che forse è un quesito banale, ma non sono per niente esperta di PCR!

mo-lab
Utente Junior

Città: utrecht


348 Messaggi

Inserito il - 08 aprile 2011 : 14:15:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mo-lab Invia a mo-lab un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
dopo aver estratto l rna totale fai il cdna con degli oligo dt...a questo punto loro metteranno in macchina il cdna e lo amplificheranno con dei primers specifici per il tuo gene che tu dovresti avere..ciao
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Daria85
Utente

aplisia



678 Messaggi

Inserito il - 15 aprile 2011 : 20:22:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Daria85 Invia a Daria85 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
io faccio sempre RT cn random esameri...io farei entrambi i filam, poi cm cntr fai una pcr sull actina. se viene procedi cn la pcr x il tuo gene.
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