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 Vettore d'espressione lambda gt11
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gbarutello
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 10 aprile 2011 : 12:56:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di gbarutello Invia a gbarutello un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti, sono un po' confusa sul "funzionamento" del vettore lambda gt11.. Se clono un gene nel sito di clonaggio EcoRI di gt11 (posto all'interno del gene lacZ)il tutto posto sotto controllo di un promotore forte tipo T7 e tutto va bene ho l'espressione della proteina di fusione giusto? Ma poi il fago infetta E.coli e tutto il frammento espresso Ŕ inserito nel batterio oppure l'espressione della proteina avviene direttamente in E.coli perchŔ infetto i batteri con il fago che integra il suo genoma contenente il promotore T7+inserto ecc.? non capisco.Il mio libro non lo spiega molto bene.
Grazie a chi mi saprÓ aiutare.
ciaoooooooooooooooooo

Cate90
Nuovo Arrivato

Polpetto

CittÓ: Padova


38 Messaggi

Inserito il - 11 aprile 2011 : 22:06:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Cate90 Invia a Cate90 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao gbarutello
Io ho da poco fatto l'esame di ingegneria genetica, non ho un'esperienza diretta sul campo per├▓ potrei dirti cos'ho capito io.
Dunque se riesci a clonare l'inserto per la tua proteina di interesse nel vettore -quindi hai il corretto orientamento della sequenza nel momento in cui va ad inserirsi nel sito di clonaggio- una volta che i tuoi batteri saranno stati trasformati (cio├Ę sarai riuscito a far entrare al loro interno il genoma del lambda precedentemente clonato), e solo allora, avrai l'espressione della proteina! Il fago gt11 ├Ę stato geneticamente modificato per non effettuare il ciclo lisogeno, questo infatti costituirebbe un problema per la sicurezza in laboratorio. La proteina viene espressa dal fago, sfruttando i macchinari proteici di Coli, mentre procede nel suo ciclo litico.
Spero di esserti stata d'aiuto.

Just live, without too words and troubles.
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