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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
 Inserito il - 15 aprile 2011 : 10:26:40
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Salve a tutti, volevo chiedervi se qualcuno mi potesse aiutare con i vettori di clonaggio, in particolare con il cromosoma artificiale YAC. In particolare non ho capito i ruoli trp1, ura3 e SUP4 che è un tRNA soppressore, non mi è chiaro il perchè della colorazione bianca o rossa a seconda che il gene sia espresso o meno. Vi ringrazio anticipatamente!
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
 Inserito il - 15 aprile 2011 : 11:17:13
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In pratica trp1 e ura3 permettono di selezionare le cellule che hanno acquisito YAC integro e non solo uno dei suoi due bracci. I due geni si trovano sui due diversi bracci del Cromosoma Artificiale di Lievito. Il primo permette alle cellule auxotrofe per il Triptofano di crescere in assenza di Triptofano. Per il secondo è valido lo stesso discorso, ma riferito all'Auxina.
sup4 è invece un gene di letalità (la sua espressione induce morte), presente nella regione MCS. Questo permette di selezionare le cellule che hanno ricevuto lo YAC ligato all'inserto di interesse da quelle che invece sono state trasformate con lo YAC "liscio". Il frammento di interesse viene infatti clonato all'interno di sup4, inattivandolo (un caso di inattivazione inserzionale).
RiassumendoT:
- le cellule che hanno ricevuto uno YAC con l'inserto sopravviveranno (non c'è produzione della proteina letale),
- quelle riceventi YAC senza inserto moriranno perché produrranno una proteina letale (Sup4)
- quelle che hanno ricevuto un solo braccio di YAC moriranno perché non potranno produrre triptofano o leucina (entrambe assenti nel terreno),
- quelle non trasformate moriranno perché non produrranno né triptofano né leucina, entrambe assenti nel terreno. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2011 : 12:01:32
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| Ti ringrazio! Sei stato chiarissimo! Sai anche perchè le colonie in cui SUP4 è espresso (e che come hai detto tu moriranno) danno colorazione bianca mentre quelle in cui SUP4 è inattivato dall'inserzione saranno rosse?? Ti ringrazio ancora! |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2011 : 12:14:52
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Prova a dare una letta su google books
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A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
 Inserito il - 15 aprile 2011 : 12:20:03
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| È stato utilissimo! Grazie ancora! |
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Didattica
