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scienza88
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 10 maggio 2011 : 21:10:30
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Ciao a tutti,
nel mio laboratorio stiamo mettendo appunto il westernblotting, qualcuno di voi sa a chi devo riferirmi per comprare i reagenti per la fase finale? Ovvero per sviluppare la lastra? mi hanno detto a qualche rappresentant kodak ma non ho trovato delle giuste informzioni. Potete indicarmi qualcuno?
a Roma?
grazie
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 10 maggio 2011 : 21:41:14
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Se volete sviluppare su lastra direi che Kodak è la scelta ovvia per le lastre ed i liquidi di sviluppo/fissaggio. Io usavo l'ECL della Pierce se non erro.
Esistono anche soluzioni digitali oggigiorno, come il Chemidoc della Biorad che non richiedono l'uso di lastre e camera oscura. |
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scienza88
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 10 maggio 2011 : 22:00:49
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grazie :)
volevo in realtà un numero di telefono o una mail di chi li vende. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2011 : 18:29:09
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Beh Sigma le vende (http://www.sigmaaldrich.com/labware/products/kodak-biomax-film.html), in genera hanno un po' tutto.
Poi basta che fai una ricerca per "Chemiluminescence Film" e trovi molti risultati, le più utilizzate sono comunque Kodak.
Volevo solo aggiungere una cosa giusto per completezza:
Citazione:
Esistono anche soluzioni digitali oggigiorno, come il Chemidoc della Biorad che non richiedono l'uso di lastre e camera oscura.
esistono anche metodi colorimetrici, al posto di utilizzare la chemioluminescenza fai avvenire una reazione che colora direttamente la membrana. |
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sgrencino
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 23 maggio 2011 : 11:33:02
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io sto usando un metodo colorimetrico utilizzando il 4Cloronaftolo, ma le bande sono sempre troppo tenui, qualcuno mi potrebbe dare qualche dritta?
sto pensando che sia per colpa del perossido che è troppo vecchio e quindi non in concentrazione adequata per ossidare il CN... |
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thejoint84
Nuovo Arrivato
46 Messaggi |
Inserito il - 23 maggio 2011 : 15:05:04
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Potrebbe essere un pó tutto.... inizia a cambiare il perossidovisto che hai questa impressione, e se non hai risultati soddisfacenti carica piú proteine, aumenta il tempo di blottaggio, le concentrazioni degli anticorpi....
possono essere tanti (troppi) i motivi che ti fanno venire bande deboli, ma con l´esperienza imparerai a capire quando é colpa di una cosa e quando di un´altra....
comunque in bocca al lupo e facci sapere!!! |
http://cornermolecularbiology.blogspot.com/
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 23 maggio 2011 : 16:15:39
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Sono d'accordo con thejoint84, i problemi potrebbero anche essere altri, dovresti essere sicuro che la proteina sia abbastanza presente nel tuo campione e che il problema sia solo dello sviluppo, sarebbe meglio se tu avessi un controllo su cui fare le prove.
Comunque sia se pensi che il problema sia il perossido ovviamente la prima cosa da provare è cambiare quello o anche provare ad aumentare la quantità che utilizzi di quello che hai.
Altrimenti potresti provare con altri metodi di sviluppo, per HRP come metodi colorimetrici puoi utilizzare anche carbazolo o DAB.
N.B. probabilmente lo sai già ma è bene precisarlo, la colorazione con Cloronaftolo non è stabile e dopo poco tende a sbiadire. |
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sgrencino
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
 Inserito il - 08 settembre 2011 : 11:45:05
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Grazie per le risposte,
ho ordinato il CN/DAB aumentando notevolmente la sensibilità della reazione.
Prodotto consigliato per chiunque faccia WB con reazioni colorimetriche, il TMB lo lascio a chi fà ELISA... |
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