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Crick82
Utente Junior



139 Messaggi

Inserito il - 26 ottobre 2006 : 14:21:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Crick82 Invia a Crick82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ad un seminario ho sentito parlare di una tecnica che permette di rilevare le proteine direttamente sul gel senza il trasferimento su mebrana. Non si tratta della colorazione del gel con Coomassie infatti ho sentito che utilizzano Anticorpi primari e secondari direttamente sul gel senza effettuare il trasferimento su membrana. Sapete dirmi qualcosa in più?

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 26 ottobre 2006 : 16:16:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ah si io avevo provato un paio di anni fa a farlo utilizzando un kit (mi sembra della Pierce, ma non ci giurerei!), ma i risultati sono stati molto deludenti e ho rinunciato subito!
La sensibilità (anche dichiarato dal kit) era molto inferiore rispetto alla membrana e quindi andava bene solo per proteine molto espresse!
All'epoca era appena uscito e non era ancora molto affidabile, magari adesso le cose sono migliorate!
se guardi il sito della pierce
(questo è il link: http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=01041115)
ti dicono che è stato migliorato... mah???

Esistono anche kit per visualizzare direttamante su gel proteine His-taggeg.
Beh io avevo provato un "fantastico" reagente dell'Invitrogen che non è funzionato per niente... non solo sulle mie proteine ma neanche sul loro standard fatto apposta! Inoltre dicevano che dopo aver utilizzato il reagente potevi comunque blottare il gel...
l'ho fatto ma non si è blottato niente!!! Ho colorato il gel con comassie (dopo il blot) e le proteine erano ancora lì!!!
Ho chiamato il servizio tecnico, mi hanno detto che mi avrebbero fatto contattare dal loro servizio tecnico in scozia, dopo un po' di mesi e ripetute sollecitazioni mi hanno finalmente telefonato... ho cercato di rispiegare il problema ma la linea era disturbatissima quindi mi hanno detto che mi avrebbero contattato per e-mail... passa altro tempo e mi arriva una mail dove era riportato pari pari il "troubleshooting" del manualetto del kit che avevo già e che avevo già provato da sola per cercare di risolvere il problema sempre più arrabbiata ho richiamato e mi hanno risposto che avrei potuto chiedere la restituzione del prodotto e il rimborso... ma ormai era passato troppo tempo e i termini erano scaduti!!!

Non so... io di questi kit non ne voglio più sentir parlare... ma magari adesso sono veramente migliorati!

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Crick82
Utente Junior



139 Messaggi

Inserito il - 01 novembre 2006 : 00:00:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Crick82 Invia a Crick82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie per il suggerimento, ero indeciso se provare o meno questo kit, ma dopo le tue parole propenderò per il no! Infondo a volte è meglio non cambiare la via vecchia per la nuova!

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