PCR con 2 primers reverse

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Autore

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monticone.silvia
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 27 maggio 2011 : 02:57:01

Ciao tutti,non ho mai scritto nel forum, ma vi seguo da parecchio tempo e utilizzo il sito per risolvere i miei numerosissimi problemi!!!
Scusate la banalit� della domanda...ma � possibile che se io, per errore in una PCR anzich� un forward primer e un reverse ho messo due distinti reverse per la sequenza in questione si amplifichi comunque qualcosa???
Grazie in anticipo ragazzi e complimenti per il forum, utilissimo davvero!!!

monticone.silvia
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 27 maggio 2011 : 03:17:49

Mi spiego meglio...ho due set di primers, uno pi� esterno e uno pi� interno. Temo di aver utilizzato i due reverse....ma sul gel di agarosio si vedeva cmq una bella banda. Possibile??
Grazie in anticipo a chi avr� voglia di ripondere

thejoint84
Nuovo Arrivato

46 Messaggi

Inserito il - 27 maggio 2011 : 15:10:06

Secondo me � aspecifico.... perch� se avessi messo un fwd ed un reverse non dello stesso set, qualcosa comunque ti usciva... di grandezza diversa, ma un amplificato specifico... in questo caso � impossibile avere un prodotto specifico.....
Secondo me uno dei due reverse si � legato ad un�altra sequenza ed ha fatto da forward!!!

http://cornermolecularbiology.blogspot.com/

Morfeo
Nuovo Arrivato

Citt�: Roma

110 Messaggi

Inserito il - 28 maggio 2011 : 12:41:05

Prova a disegnarti su un templato qualsiasi un reverse a monte e uno a valle per capire meglio. Comunque estender� un p� ma non amplifichi nulla!