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lyla
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Città: Napoli
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 Inserito il - 29 ottobre 2006 : 09:23:15
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salve ...a proposito do trasfezione io ho trasfettato un anfotropico più un plasmide con un silenziatore nelle 293t, questi non hanno la gfp ma ha la resistenza alla puromicina, e poi ho anche infettato con il virus prodotto cellule umane di pellein cui volevo silenziare il mio gene, ma selezionando queste con puromicina mi sono morte quasi tutte ...allora ho pensato che fosse la concentrazione di puro usata, io 2microg/ml,mi sapete dire qualcosa sulla selezione con puromicina?quando si mette, come la fate?
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valeriamassa
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Prov.: Milano
Città: milano
64 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2006 : 17:42:05
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Ciao! Io quando uso la puromicina per selezionare i fibroblasti umani trasfettati con un plasmide puromicina-resistente la uso a concentrazione di al MAX 0,5 microgrammi per ml!! Credo che forse tu abbia usato una concentrazione troppo alta, prova ad abbassarla e vedi se la situazione migliora.
Ciao |
valeria |
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lyla
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
31 Messaggi |
Inserito il - 31 ottobre 2006 : 19:20:20
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io ho provato con 1.25 e mi sembra che le cose vadano meglio, cioè mi muoiono in 3-4 giorni le cellule senza costrutto dentro, cosi come dovrebbe essere. invece ho provato con 05 e 0.7 ma anche dopo 5 giorni le cellule non resistenti non morivano!che ne pensi?
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valeriamassa
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Prov.: Milano
Città: milano
64 Messaggi |
Inserito il - 02 novembre 2006 : 19:09:33
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Con 0,5 microgrammi per ml dopo una settimana di selezione dovrebbero morire tutte o quasi le cellule di controllo (quelle trasfettate con il TE) e la maggior parte delle cellule che non hanno il costrutto con la resistenza. Vedi come vanno le cose dopo 7 giorni di trattamanto a 0,5 e poi fammi sapere. Ma io non ho capito una cosa però: tu hai provato con 0,5 e poi hai alzato la concentrazione a 1,25? O hai iniziato la selezione direttamente con 1,25? |
valeria |
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Concentrazione puromicina [Da: transfezioni ...]
Didattica e Relazioni
