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Discussione |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
 Inserito il - 30 ottobre 2006 : 16:53:39
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non mi riesce la doppia fluorescenza AIUTO
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 30 ottobre 2006 : 18:12:10
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Ciao cin,
ti aiuterei volentieri ma non so quale sia il problema... in che senso non ti riesce la doppia fluorescenza???
Cosa è successo???
Hai provato a fala e...
cosa vedi???
Dacci maggiori info! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 31 ottobre 2006 : 09:20:10
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Vi pare che io avrei fatto una domanda del genere? Come al solito nel mio lab c'è qualcuno, vero Ale? Che sapendo usare il computer peggio di me, non sa nemmeno entrare in Molecularlab con la propria password, nonostante gli abbia fatto vedere come si fa.....
Grazie comunque......ad entrambi, provvederò ad informarla.... |
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calcagnao
Nuovo Arrivato
Città: padova
25 Messaggi |
Inserito il - 31 ottobre 2006 : 09:38:21
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| carissimi, finalmente ho il mio nome (calcagnao), cin non c'entra. Il mio problema riguarda la doppia fluorescenza al confocale. Ho adipociti umani e di mouse (3T3-L1), 2 Ab (fatti in rabbit e in goat) che da soli, con secondari della mol Probes Invitrogen, funzionano; ho provato la doppia flourescenza con sec. FITC e TRITC sia in miscela che in tempi diversi, ma il segnale sembra si annulli Che fare? AIUTO grazie |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 31 ottobre 2006 : 21:14:51
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Hmmm... potrebbe dipendere dai filtri che usi sul microscopio... anche se FITC e TRITC hanno spettri chiaramente separati. Ma quando dici che il segnale si annulla cosa intendi esattamente?
L'altra cosa che mi viene in mente è che i due anticorpi "si diano fastidio" a vicenda quando li usi insieme. Che antigeni vai a riconoscere? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 01 novembre 2006 : 19:10:08
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Citazione:
Messaggio inserito da cin
Vi pare che io avrei fatto una domanda del genere?
ah beh! In effetti mi sembrava strano!!! 
Dai non prendertela!
Comunque calcagnao benvenuta nel forum! 
Non saprei dirti molto più di chick, mi sembra strano che il segnale si annulli! L'unica cosa è come dice lui che interferiscano gli anticorpi o che ci sia qualcosa di sbagliato nella metodica! Hai ripetuto l'esperimeto più volte con gli stessi risultati? |
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calcagnao
Nuovo Arrivato
Città: padova
25 Messaggi |
Inserito il - 02 novembre 2006 : 14:40:57
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Citazione:
se FITC e TRITC hanno spettri chiaramente separati. Ma quando dici che il segnale si annulla cosa intendi esattamente?
grazie del vostro interessamento, il segnale si annulla nel senso che vedo esattamente come il controllo negativo (solo secondario)
Citazione:
i due anticorpi "si diano fastidio" a vicenda quando li usi insieme. Che antigeni vai a riconoscere?
sono: il GLUT4, recettore che trasloca in membrana sotto stimolo insulinico (e i miei adipociti erano stati stimolati con insulina), ( Ab anti- glut4 fatto in goat) e una proteine citoplasmatica, la leptina (Ab anti leptina fatto in rabbit)
Citazione:
Hai ripetuto l'esperimeto più volte con gli stessi risultati?
ho ripetuto più volte, con sempre nessun risultato |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 02 novembre 2006 : 19:56:58
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Mumble mumble mumble
Mah? Scusa la mia ignoranza in proposito... ma la leptina per caso si lega al Glut4??? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 02 novembre 2006 : 20:49:00
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Non dovrebbe....
Ad ogni modo io proverei a cambiare secondari. Ad es. se stai usando un FITC-anti goat e un TRITC-anti rabbit prova a fare il contrario (FITC-anti rabbit e TRITC-anti goat) oppure cambia del tutto uno dei due secondari.
Al momento non mi vengono altre idee... ma ci penso e ti faccio sapere se mi viene in mente qualcosa d'altro! |
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calcagnao
Nuovo Arrivato
Città: padova
25 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2006 : 09:02:26
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Non dovrebbe....
Ad ogni modo io proverei a cambiare secondari. Ad es. se stai usando un FITC-anti goat e un TRITC-anti rabbit prova a fare il contrario (FITC-anti rabbit e TRITC-anti goat) oppure cambia del tutto uno dei due secondari.
Al momento non mi vengono altre idee... ma ci penso e ti faccio sapere se mi viene in mente qualcosa d'altro!
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calcagnao
Nuovo Arrivato
Città: padova
25 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2006 : 09:05:09
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| la leptina non si lega al glut4, cercherò nuovi secondari (sempre che qualcuno me li compri) grazie di tutto, anche per i nuovi suggerimenti!!! |
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 06 novembre 2006 : 11:09:36
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| sto leggendo gli articoli di PNAS; in effetti, le mie 3T3-L1 non si riescono a differenziare molto, restano sempre molti vacuoli, riproverò sugli adipociti umani, che sono un po' più diferenziati GRAZIE MILLE |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 06 novembre 2006 : 17:45:40
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Ale, fai un casino dell'accidente! Quando entri nel forum accertati di essere entrata con la tua password!!!!!!!
Ragazzi, non si può risolvere questo problema? Cosa posso fare perchè ogni volta che si entra nel forum con un utente, successivamente, nel riaprirlo, non mi apra l'ultimo utente utilizzato? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 06 novembre 2006 : 19:49:50
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Cin sei veramante tu???
Che confusione!!! Comunque io prima di allontanarmi dal computer faccio il logout così non rimane più il nome utente! Magari però atreliu ha un metodo per risolvere il vostro problema!
x Calcagnao: scusa ma a questo punto mi sorge una domanda, tu la fluorescenza singola l'hai fatta sulle stesse cellule (3T3) vero??? Non su altre? |
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calcagnao
Nuovo Arrivato
Città: padova
25 Messaggi |
Inserito il - 07 novembre 2006 : 09:36:19
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Citazione:
la fluorescenza singola l'hai fatta sulle stesse cellule (3T3) vero??? Non su altre?
certamente, sulle stesse 3T3. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 09 novembre 2006 : 00:31:29
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| Beh allora si per certo che esprimono i tuoi antigeni, il problema non è quello (mi era venuto il dubbio dopo il messaggio di RM!)... rimane l'iterferenza tra gli anticorpi! |
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