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albertos
Nuovo Arrivato
Prov.: livorno
Città: livorno
26 Messaggi |
 Inserito il - 30 ottobre 2006 : 19:17:34
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Per selezionare un espianto con il gene nptII, si deve mettere nel medium una certa quantita di canamicina e di carbencillina. Perche vengono usati entrambi?
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 01 novembre 2006 : 00:59:57
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Si usa il doppio antibiotico se stai usando un plasmide cointegrativo. La carbencillina è una penicillina e serve per selezionare i batteri contenenti il plasmide con il T-DNA (che hanno un pBR322). La kanamicina serve per selezionare quegli Agrobacteria con nptII.
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albertos
Nuovo Arrivato
Prov.: livorno
Città: livorno
26 Messaggi |
Inserito il - 01 novembre 2006 : 16:14:19
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Grazie per la risposta, comunque scusa la mia ignoranza ma mi rimane questo dubbio
In lab abbiamo infettato gli espianti di una pianta con l'agrobatterio e dopo l'infezione li abbiamo trasferiti in terreno con canamicina e carbencillina.
Percio la canamicina permetterà la crescita dei germogli GM solo nelle cellule con il plasmide, fino a qui ok, ma perchè nel terreno abbiamo messo anche la carbencillina, non bastava solo la canamicina come marker.
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 01 novembre 2006 : 20:23:09
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Hmmmm... sicuro che non ci fosse qualche E.Coli di mezzo durante il processo?
Premesso che che di piante ne so pochissimo, credo che se l'Agrobacterium è stato generato da coniugazione con Coli avrà anche un gene x la resistenza all'ampicillina oltre che alla kanamicina, quindi selezioni con entrambi per essere sicuro di avere entrambi i plasmidi.
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 01 novembre 2006 : 22:57:42
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se non ricordo male c'era dentro il gene NPTII che conferisce resistenza alla Kanamicina, e dovrebbe servire per selezionare le cellule vegetali che hanno integrato il TDNA,poi , avete usato un vettore binario o un vettore cointegrato,E.Coli comunque sia c'e' di mezzo in entrambi i casi,poi volevo dirti (scusa la mia cocciutagine)che parlando di A.tumefacies trasferisce il tratto di plasmide in tutte le piante allo stesso modo ,visto che solo quelli sono i geni implicati nel processo di virulenza,cmq se ne sai di piu' di questo fatto scrivi perche' sono curioso |
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albertos
Nuovo Arrivato
Prov.: livorno
Città: livorno
26 Messaggi |
Inserito il - 02 novembre 2006 : 00:08:27
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X chick80: Io utilizzavo l'agrobatterio gia contenente il plasmide con il T-DNA, il plasmide è un plasmide monsanto e penso che lo inseriscano tramite trattamento chimico.
Potrebbe essere che una volta infettate le cellule vegetali, la canamicina permette la crescita dei germogli mentre la carbencillina viene aggiunta per eliminare tutti i batteri rimasti perchè ormai non servono piu dopo l'infezione e vanno solo ad essere di intralcio?
Quale è il gene che inattiva la carbencillina magari vedo se è presente nel plasmide?
Per Patrizio: da quello che so si il meccanismo di infezione dell'agrobatterio è sempre lo stesso, però la virulenza cambia da pianta a pianta.
Infatti si è visto che effettua un'ottima trasformazione in dicotiledoni come tabbacco in primis, pomodoro, patate, e i protocolli sono differenti. Prima della creazione dell OGM ci sono 3 step,
1- studio per la crescita in vitro della pianta di interesse
2- studio dell'ottimizzazione pianta-Agrobatterio
3- creazione pianta GM
Infatti si è visto che c'è differenza nella trasformazione di monocotiledoni , dicotiledoni, ipocotili. Penso che sia per la differenza dei genomi, magari qualcuno qui è esperto in questo campo..?
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 02 novembre 2006 : 02:15:11
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Il gene per la resistenza alla carbencillina è il solito amp che si usa spesso come resistenza all'ampicillina, che codifica x una beta-lattamasi, che inattiva molte penicilline.
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albertos
Nuovo Arrivato
Prov.: livorno
Città: livorno
26 Messaggi |
Inserito il - 02 novembre 2006 : 11:38:10
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Grazie per la risposta, thanks.
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Kanamicina , carbencillina
Didattica e Relazioni
