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 Inattivazione x "fenolizzazione"
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astrolety
Nuovo Arrivato



7 Messaggi

Inserito il - 29 giugno 2011 : 18:14:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di astrolety Invia a astrolety un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!
sto per procedere con un clonaggio, ho scelto i miei enzimi di restrizione ma mentre controllavo XhoI ho trovato che il datasheet mi dice di inattivarlo per "fenolizzazione" e non a 65°C. qualcuno sa cosa voglia dire???
Grazie a tutti:)

0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Città: Paris, VIIème arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 29 giugno 2011 : 18:22:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Dal nome mi sa tanto di "aggiunta di fenolo per denaturare l'enzima", ma attendi chi ne sa di più.

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss

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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8380 Messaggi

Inserito il - 29 giugno 2011 : 20:06:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sì il concetto è quello detto da 0barra1, però no saprei dirti esattamente quanto aggiungerne. Visto che la Roche è l'unica che ti dice di fare così, le altre ditte ti fanno tranquillamente inattivare Xho I al calore, e non ti dicono niente sul data sheet su come fare, io sentirei direttamente loro!
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astrolety
Nuovo Arrivato



7 Messaggi

Inserito il - 29 giugno 2011 : 20:11:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di astrolety Invia a astrolety un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ok allora intanto provo a chiedere alla roche...
altrimenti pensavo anche ad una estrazione fenolo cloroformio (quindi semplicemente pulisci il DNA ristretto), però non saprei...
per il momento grazie ad entrambi!;)
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8380 Messaggi

Inserito il - 29 giugno 2011 : 20:53:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sì il fatto è comunque che devi inattivare l'enzima, dover necessariamente purificare mediante fenolo cloroformio dopo restrizione non mi sembra una cosa molto pratica. Ti direi di comprare l'enzima da qualcun altro, ma ovviamente se hai già quello... prova a sentire cosa ti dicono.
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roberta.s
Utente Junior

yeast

Città: Parigi


564 Messaggi

Inserito il - 30 giugno 2011 : 11:15:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di roberta.s Invia a roberta.s un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Che cosa devi fare dopo la digestione? Perchè se ad esempio devi estrarre un frammento dal gel, puoi anche non disattivare l'enzima, ma caricarlo su gel d'agarosio subito dopo la digestione.
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