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merlino78
Nuovo Arrivato



1 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2011 : 09:53:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di merlino78 Invia a merlino78 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
salve a tutti. m chiamo samantha e sn al mio primo anno di dottorato.
avrei un quesito....ho un anticorpo primario monoclonale, come secondario ne devo usare per forza uno monoclonale o posso usare un policlonale???
grazie.....

Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2011 : 10:33:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
perchè ti fai questa domanda? cosa ti interessa se il secondario è un mono o un policlonale? l'importante è che riconosca il primario, che sia quindi derivato dalla stessa specie: primario rabbit = secondario rabbit, primario mouse = secondario mouse, etc etc etc...

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Città: Paris, VIIème arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2011 : 11:08:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, ma in teoria se il primario è rabbit il secondario non dovrebbe essere di un'altra specie (es. chicken)?
Un animale non produce infatti ab contro i suoi stessi ag (l'Fc del mAb1). Almeno se vuole mantenersi in salute

EDIT
Circa la clonalità non saprei e quindi attendo curioso la risposta di qualche utente. Tuttavia l'anno scorso, durante lo stage di fine laurea triennale, mi pare di ricordare che gli ab per l'immuno western blot li purificavamo per cromatografia d'affinità da siero, dunque si trattava di policlonali...

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss

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biocandy
Utente Junior

frangipani



370 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2011 : 11:26:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biocandy Invia a biocandy un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da 0barra1

Ciao, ma in teoria se il primario è rabbit il secondario non dovrebbe essere di un'altra specie (es. chicken)?
Un animale non produce infatti ab contro i suoi stessi ag (l'Fc del mAb1). Almeno se vuole mantenersi in salute

EDIT
Circa la clonalità non saprei e quindi attendo curioso la risposta di qualche utente. Tuttavia l'anno scorso, durante lo stage di fine laurea triennale, mi pare di ricordare che gli ab per l'immuno western blot li purificavamo per cromatografia d'affinità da siero, dunque si trattava di policlonali...



quoto Obarra1..generalmente l'anticorpo secondario è prodotto in una specie diversa e può essere anche policlonale per quello che ne so io!
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2011 : 11:55:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Penso che Iside intendesse:

se il primario è fatto ad es. in rabbit allora bisogna usare un anti-rabbit

Altra cosa: è meglio evitare di usare anticorpi primari prodotti nella stessa specie che si esamina (es. se lavori su topo evita anticorpi fatti in topo) per evitare il legame aspecifico del secondario sulle IgG endogene.

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0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Città: Paris, VIIème arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2011 : 11:57:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
E per quanto riguarda la clonalità?

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A Universe From Nothing, Lawrence Krauss

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Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Città: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2011 : 13:19:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da chick80

Penso che Iside intendesse:

se il primario è fatto ad es. in rabbit allora bisogna usare un anti-rabbit




si appunto, era questo che io intendevo.
non credo che la clonalità sia importante, penso però che, essendo i secondari venduti in grandi quantità e a prezzi inferiori di ab primari, convenga molto di più che siano policlonali...

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1042 Messaggi

Inserito il - 14 settembre 2012 : 11:55:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ecco questa discussione mi ha risolto dei dubbi che avevo.
Nei Western fatti a partire dagli His-Pulldown assays che abbiamo fatto in laboratorio infatti compaiono sempre anche le bande delle catene pesanti e leggere delle IgG usate per fissare la proteina bait alla resina nel Pulldown. All'inizio credevo che l'anticorpo secondario (anti-mouse) legasse la porzione Fc del primario, ma se fosse stato così allora le bande delle IgG non dovevano comparire nella lastra...visto che dopo tutti i passaggi denaturanti (SDS-PAGE compresa) una vera e propria porzione Fc antigenica non esiste più.
Quindi il secondario è semplicemente policlonale e ogni anticorpo può riconoscere porzioni diverse delle catene leggere e pesanti del primario di topo.


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