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merlino78
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 07 luglio 2011 : 09:53:28
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salve a tutti. m chiamo samantha e sn al mio primo anno di dottorato.
avrei un quesito....ho un anticorpo primario monoclonale, come secondario ne devo usare per forza uno monoclonale o posso usare un policlonale???
grazie.....
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2011 : 10:33:22
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| perchè ti fai questa domanda? cosa ti interessa se il secondario è un mono o un policlonale? l'importante è che riconosca il primario, che sia quindi derivato dalla stessa specie: primario rabbit = secondario rabbit, primario mouse = secondario mouse, etc etc etc... |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2011 : 11:08:21
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Ciao, ma in teoria se il primario è rabbit il secondario non dovrebbe essere di un'altra specie (es. chicken)?
Un animale non produce infatti ab contro i suoi stessi ag (l'Fc del mAb1). Almeno se vuole mantenersi in salute 
EDIT
Circa la clonalità non saprei e quindi attendo curioso la risposta di qualche utente. Tuttavia l'anno scorso, durante lo stage di fine laurea triennale, mi pare di ricordare che gli ab per l'immuno western blot li purificavamo per cromatografia d'affinità da siero, dunque si trattava di policlonali... |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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biocandy
Utente Junior
370 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2011 : 11:26:33
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Citazione:
Messaggio inserito da 0barra1
Ciao, ma in teoria se il primario è rabbit il secondario non dovrebbe essere di un'altra specie (es. chicken)?
Un animale non produce infatti ab contro i suoi stessi ag (l'Fc del mAb1). Almeno se vuole mantenersi in salute
EDIT
Circa la clonalità non saprei e quindi attendo curioso la risposta di qualche utente. Tuttavia l'anno scorso, durante lo stage di fine laurea triennale, mi pare di ricordare che gli ab per l'immuno western blot li purificavamo per cromatografia d'affinità da siero, dunque si trattava di policlonali...
quoto Obarra1..generalmente l'anticorpo secondario è prodotto in una specie diversa e può essere anche policlonale per quello che ne so io! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2011 : 11:55:32
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Penso che Iside intendesse:
se il primario è fatto ad es. in rabbit allora bisogna usare un anti-rabbit
Altra cosa: è meglio evitare di usare anticorpi primari prodotti nella stessa specie che si esamina (es. se lavori su topo evita anticorpi fatti in topo) per evitare il legame aspecifico del secondario sulle IgG endogene. |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2011 : 11:57:01
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| E per quanto riguarda la clonalità? |
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A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2011 : 13:19:05
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Penso che Iside intendesse:
se il primario è fatto ad es. in rabbit allora bisogna usare un anti-rabbit
si appunto, era questo che io intendevo.
non credo che la clonalità sia importante, penso però che, essendo i secondari venduti in grandi quantità e a prezzi inferiori di ab primari, convenga molto di più che siano policlonali... |
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 14 settembre 2012 : 11:55:12
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Ecco questa discussione mi ha risolto dei dubbi che avevo.
Nei Western fatti a partire dagli His-Pulldown assays che abbiamo fatto in laboratorio infatti compaiono sempre anche le bande delle catene pesanti e leggere delle IgG usate per fissare la proteina bait alla resina nel Pulldown. All'inizio credevo che l'anticorpo secondario (anti-mouse) legasse la porzione Fc del primario, ma se fosse stato così allora le bande delle IgG non dovevano comparire nella lastra...visto che dopo tutti i passaggi denaturanti (SDS-PAGE compresa) una vera e propria porzione Fc antigenica non esiste più.
Quindi il secondario è semplicemente policlonale e ogni anticorpo può riconoscere porzioni diverse delle catene leggere e pesanti del primario di topo. |
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