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immetella
Nuovo Arrivato
Prov.: Pescara
Città: Pescara
32 Messaggi |
 Inserito il - 20 luglio 2011 : 13:46:48
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Ciao a tutti! Mi sto organizzando per cominciare a fare una serie di immunoprecipitazioni ma non sono molto esperta....il protocollo preso sul sito abcam suggerisce di usare la proteina G per immunoprecipitare anticorpi Mouse IgG1 ma il problema è che sul sito della SIGMA (dove sto cercando la proteina G) ce ne sono tantissime!...proteina g agarose, sepharose, liofilizzata e non, isolata da streptococco o non e così via.....con quale criterio scegliere???In letteratura non ho trovato info sulla IP della proteina endogena di mio interesse(molti trasfettano le cellule ed immunoprecipitano con anticorpi contro il tag...). Nel mio lab non c'è nessuno che è un po' più esperto in IP...potete aiutarmi?
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 20 luglio 2011 : 15:54:16
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io uso la proteina A/G plus e mi trovo bene...penso sia sepharose, ma anche agarose va bene!io però lego Ig umani...
baci
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 20 luglio 2011 : 16:39:36
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A/G plus della santa cruz dovrebbe essere coniugata con agarose, ha il vantaggio che non stai lì a preoccuparti quale delle due proteine usare.
Io in lab uso le resine magnetiche oppure proteina G sepharose (sigma, cat 3296-5ml) e proteina A sepharose (sigma 9424-5ml)
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 20 luglio 2011 : 17:13:29
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Sul sito della Sigma è un delirio in effetti, comunque visto che per altri motivi stavo cercando anch'io una protein G-Agarosio che utilizzavo in passato e ho fatto un po' di ricerche ti metto i link ai datasheet che ho trovato sul sito Sigma:
PROTEIN G IMMOBILIZED ON AGAROSE
PROTEIN A-IMMOBILIZED
(ci sono anche i due codici che ha suggerito Iside)
Ne approfitto anche per fare una domanda che mi è stata posta, non per un mio esperimento, quindi non so i dettagli però si tratterebbe di immunoprecipitare sia IgG che IgA, qualcuno di voi l'ha fatto? Cosa avete utilizzato?
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 20 luglio 2011 : 17:28:32
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GFPina, leggo da una tabella di protocols book che mi hanno regalato ad un congresso:
dunque, human IgG1, IgG2 e IgG4 sono IP con pari (ed alta) efficienza sia con proteina A che G mentre IgG3 solo con proteina G
Human IgA sono IP con bassa efficienza solo con proteina G, quindi direi di usare proteina G
Per mouse e rat la situazione delle IgG è un po' diversa, ma dato che devi IP anche IgA immagino che stiamo parlando di human Ig.
Serve? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 20 luglio 2011 : 17:58:18
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No sono Ig di topo.
Io in effetti mi ricordavo (vaghi ricordi) quello che mi hai confermato tu e avrei detto appunto che la proteina G legava anche se con bassa affinità le IgA. Però facendo una ricerca ho trovato un po' di cose contrastanti per quanto riguarda IgA e proteina A o G. Ho visto però che la soluzione migliore sembra la proteina L, dovrebbe legare con alta affinità sia IgA che IgG.
Grazie mille delle informazioni!
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immetella
Nuovo Arrivato
Prov.: Pescara
Città: Pescara
32 Messaggi |
Inserito il - 21 luglio 2011 : 10:35:23
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| Grazie a tutti per l'aiuto...alla fine ho ordinato la proteina A/G plus agarose di Santa Cruz (visto che il prof mi ha detto di ordinare gli Ab santa cruz (!!!) e loro la consigliano)...speriamo bene con le IP ( e con gli anticorpi...)!So che è una procedura molto delicata...vedremo! |
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Immunoprecipitazione e proteina G
Didattica
