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Flown87
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 21 luglio 2011 : 19:02:51
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Ciao a tutti!
Sono una studentessa di veterinaria, sto facendo un tirocinio sul Toxoplasma gondii nel sangue e nel latte caprino.
Premetto che non sono assolutamente esperta di PCR. Alle analisi sierologiche, mediante tecnica MAT, molti campioni sono risultati positivi e, su questi, stiamo facendo le PCR. Dopo averne provate fino allo sfinimento, continuiamo ad avere risultati negativi, anche mettendo alcuni campioni di DNA che sarebbero dovuti venire sicuramente positivi. Non riusciamo a capire dove sbagliamo, se possa essere qualche problema di inquinamento, di procedura nel TC, di Master Mix o altro. Allego una foto delle tante PCR provate, non so se qualcuno potrebbe aiutarmi.Grazie della disponibilità
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Nella foto del 18/07 considerate solo la parte di destra, dato che nella sinistra ho messo del DNA troppo vecchio.
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 21 luglio 2011 : 20:50:47
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Ehm magari la prossima volta riduci le foto prima di caricarle, questo post è impossibile da leggere così. (comunque qualche moderatore di questa sezione te le ridurrà).
Nel frattempo da quello che sono riuscita a vedere e leggere, tu utilizzi sangue e latte per fare la PCR giusto?
Ci potrebbero essere varie sostanze che inibiscono la reazione di PCR quindi prova a diluire molto i tuoi campioni, fai varie prove di diluizione su un campione che pensi debba essere positivo. |
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Flown87
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 21 luglio 2011 : 21:17:45
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Scusate per le incredibili dimensioni delle foto, non credevo mi venissero così.
Si, le ho fatte prima sul sangue e poi sul latte.
Provo a diluirli quando faccio l'estrazione.
Per caso sapresti dirmi qualcosa sulle temperature di conservazione e di utilizzo del DNA?Io lo conservo in congelatore e lo lascio a temp.ambiente per qualche minuto prima di utilizzarlo(lo stesso faccio per le altre cose che utilizzo) |
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atreliu
Amministratore
Prov.: Milano
Città: Milano
2484 Messaggi |
Inserito il - 22 luglio 2011 : 04:31:13
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Immagini ridimensionate 
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Flown87
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 22 luglio 2011 : 09:28:57
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| Grazie mille! |
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Emanuele.Valli
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 26 luglio 2011 : 22:23:59
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Il DNA non ha grossi problemi di conservazione. Tipo il genomico può essere conservato tranquillamente a 4°C ma conosco gente che lo tiene anche a temperatura ambiente. Personalmente lo conservo a -20°C . Il tutto è sempre da rapportare alla possibilità di contaminanti (Dnasi o altre schifezze) che agiscono con diversa efficienza seconda della temperatura.
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zerhos
Utente Junior
Prov.: Pisa
Città: Pisa
421 Messaggi |
Inserito il - 27 luglio 2011 : 19:00:06
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| Potresti darci altre informazioni? del tipo: come fai la master mix, quanto è grande l'amplicone che dovresti ottenere, che profilo usi? |
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Salvador.Dalì
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Problemi con la PCR
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