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elenaOBP
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3 Messaggi
Inserito il - 22 luglio 2011 : 15:42:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di elenaOBP Invia a elenaOBP un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti,
Mi chiamo Elena e sono uno dottorando all'Università di Manchester.
Vi vorrei chiedere un consiglio. Per la mio progetto devo esprimere una proteina in E.coli. Sono riuscita ad esprimerla ma è una proteina insolubile. Ho usato un protocollo di solubilizzazione con UREA 8M.Il problema è che quando l'ho messa a dializzare il campione è diventato un colore biancastro. HO tenuto il campione un paio di ore in ghiaccio prima di dializzarlo.. è possibile che a basse temperature l'urea sia precipitata?

Grazie della collaborazione
Elena

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 22 luglio 2011 : 15:50:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sì l'UREA a freddo precipita!
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elenaOBP
Nuovo Arrivato



3 Messaggi
Inserito il - 22 luglio 2011 : 15:59:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di elenaOBP Invia a elenaOBP un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie GFpina!
Hai un idea di come la posso solubilizzare?
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 22 luglio 2011 : 16:05:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io i miei campioni in Urea 8M li conservo in frigo o a -20°C, però poi prima di utilizzarli li porto a temperatura ambiente e vortexo.
Se devo fare qualche metodica "a freddo" cerco di non scendere mai sotto 10°C se ho campioni o soluzioni con Urea 8M.
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elenaOBP
Nuovo Arrivato



3 Messaggi
Inserito il - 22 luglio 2011 : 16:11:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di elenaOBP Invia a elenaOBP un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ok... posso provare... ora sta dializzando a 3 C.. posso provarli a tenerli un po' a temperatura ambiente e poi li metto di nuovo a dializzare..
Grazie mille del consiglio..
Ti faccio sapere il risultato...
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