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Matteo I.
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2 Messaggi

Inserito il - 26 luglio 2011 : 17:54:59

Salve a tutti,

sono uno studente del quarto anno a biotecnologie molecolari (Torino).
Di recente mi sono imbattuto in un articolo interessante, ma che mi lascia alquanto perplesso:
In questo lavoro viene utilizzata una ORF di chinasi (non miristoilate, non modificate, solo taggate con v5) con cui viene trasfettata la linea cellulare A375 esprimente BRAF v600e. Lo scopo � capire quale delle chinasi contenute nella libreria conferisce resistenza al trattamento con PLX4720 (Inibitore di RAF) Loro ne trovano una in particolare: COT (MAP3K8) Ma tutte le altre (circa 600) non danno resistenza perch� non sono attivate oppure perch� sono attivate ma non hanno substrato? Nel lavoro non viene presentato nessun blot per la verifica dell'attivazione delle chinasi overespresse quindi loro NON si accertano in nessun modo che queste chinasi siano o meno attive, di conseguenza, come fanno a supporre che le chinasi che NON danno resistenza non la danno effettivamente oppure non la danno perch� manca il ligando o substrato IN QUELLA SPECIFICA CELL LINE! ligandi o substrati che magari sono presenti in tumori resistenti al trattamento con PLX?

Insomma, se io non sono sicuro a priori che tutte le chinasi trasfettate siano attivate, come faccio a verificare l'ipotesi? Non posso! Le altre chinasi magari potrebbero dare resistenza in altre linee cellulari esprimenti BRAF mutato ma in questa no! Di conseguenza � un "buco" nel lavoro oppure c'� qualcosa di scontato (magari caratteristiche della linea cellulare, nel medium di crescita) che io non riesco ad afferrare?

GRAZIE 1000!

P.S. questo � il link http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21107320