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Federicax1989
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Inserito il - 03 agosto 2011 : 12:46:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Federicax1989 Invia a Federicax1989 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ragazzi non trovo niente di quest'argomento su internet-Anello di clonazione-.sapete indirizzarmi voi o spiegarmi qualcosa?

Patrizio
Moderatore

mago

Città: Vancouver


1899 Messaggi

Inserito il - 03 agosto 2011 : 14:31:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
hai cercato come "cloning ring" ? praticamente serve per isolare le singole colonie di cellule che crescono in adesione , in breve fai crescere le tue cellule in una dish , poi usando il microscopio attacchi l'anello in modo da isolare le colonie che si sono formate da quella cellula dal resto del contesto , e in questo modo puoi poi separarle tipo staccandole e mettendole in un'altra dish o flask

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Federicax1989
Utente Junior



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Inserito il - 03 agosto 2011 : 16:32:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Federicax1989 Invia a Federicax1989 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
hm io ho trovato una ricerca..ma è in inglese, c'è la traduzione fatta da google che mi pare abbastanza attendibile tranne per qualche parola..te la posso far leggere così magari me la aggiusti un pochino?qui nn ho un vocabolario di inglese purtroppo:s nn sto a casa
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Patrizio
Moderatore

mago

Città: Vancouver


1899 Messaggi

Inserito il - 03 agosto 2011 : 16:57:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se vuoi postala ..a meno che non sia un papiro, ma secondo me la cosa giusta da fare sarebbe quella di leggerti quello che hai trovato e magari spiegarlo qui cosi' da vederlo insieme, l'inglese nella biologia specialmente se vuoi far ricerca è fondamentale come le altre discipline quindi faresti bene ad esercitarti o a sforzarti , se non hai un vocabolario usa google http://translate.google.com/ .
comunque come ho scritto prima fondamentalmente è una tecnica che si usa per isolare colonie formate da una singola cellula alias cloni


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Federicax1989
Utente Junior



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Inserito il - 03 agosto 2011 : 16:58:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Federicax1989 Invia a Federicax1989 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Federicax1989

hm io ho trovato una ricerca..ma è in inglese, c'è la traduzione fatta da google che mi pare abbastanza attendibile tranne per qualche parola..te la posso far leggere così magari me la aggiusti un pochino?qui nn ho un vocabolario di inglese purtroppo:s nn sto a casa



Vabbè in effetti è troppo dettagliato quel documento,quindi lasciamo perdere però volevo sapere il metodo della fiasca,utile a isolare cellule da capsulae petri.Non ho capito in cosa consiste
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Patrizio
Moderatore

mago

Città: Vancouver


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Inserito il - 03 agosto 2011 : 18:16:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
supponiamo che tu voglia fare dei cloni stabili di cellule di mammifero e quindi cellule che hanno integrato nel genoma un plasmide che gli hai trasfettato, ora, la frequenza di ricombinazione nei mammiferi è molto bassa rispetto ad altri organismi come ad esempio nel lievito e non è una cosa semplice tramite ricombinazione omologa che il tuo plasmide venga integrato.
Dopo aver fatto la trasfezione in una 6 wells plate puoi splittare le cellule e risospenderle in un volume maggiore seminandole in una petri , se osservi le cellule al microscopio vedrai che in alcuni punti ce n'e' solo una, in altri 3-4 molto vicine etc... ,
a questo punto ti segni con un pennarello ( tipo fai una X sotto la petri ) il punto in cui quella singola cellula o le singole cellule si trovano e dopo 3-4-5 giorni, vedrai che da quella singola cellula se ne sono formate altre, ora dovrai separarle e utilizzi quel cilindro lo appiccichi con una "colla" e le tue cellule saranno all'interno separate dalle altre, ora queste cellule le stacchi e le metti a cresce in una flask piccola o in una dish piccola e aspetti che si moltiplichino;
a questo punto tratti queste cellule con un antibiotico di selezione, in genere nei mammiferi il plasmide non integrato viene perso dopo un certo periodo di tempo, quindi se le cellule hanno il tuo plasmide all'interno del genoma, avranno sempre la resistenza otherwise all gonna die


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Federicax1989
Utente Junior



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Inserito il - 03 agosto 2011 : 18:37:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Federicax1989 Invia a Federicax1989 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
hm forse non era quello che intendeva il mio professore ,lui dice che si usa l'irradiazione per distruggere tutte le cellule tranne il clone che vogliamo isolare,il quale viene ricoperto di piombo per essere protetto e poi viene recuperato per tripsinizzazione.Ma io nn so cos'è una fiasca ,non ce l'ho presente.
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Patrizio
Moderatore

mago

Città: Vancouver


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Inserito il - 03 agosto 2011 : 19:12:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
guarda ...io ho portato l'esempio del plasmide, ma lo scopo e' isolare delle cellule che ti servono, poi ovvio le applicazioni possono essere diverse sara' che in questo caso si una un cilindro chiuso da sopra non lo so', be flexible


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Federicax1989
Utente Junior



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Inserito il - 03 agosto 2011 : 19:48:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Federicax1989 Invia a Federicax1989 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da Patrizio

guarda ...io ho portato l'esempio del plasmide, ma lo scopo e' isolare delle cellule che ti servono, poi ovvio le applicazioni possono essere diverse sara' che in questo caso si una un cilindro chiuso da sopra non lo so', be flexible



Grazie
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