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Autore Discussione  

immetella
Nuovo Arrivato

Dory
Prov.: Pescara
Città: Pescara


32 Messaggi
Inserito il - 04 agosto 2011 : 16:22:19  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di immetella Invia a immetella un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti! Mi è stato spedito dall'America un plasmide su carta, ho un protocollo per estrarlo che prevede l'uso di TE autoclavato, il mio problema è che proprio oggi l'autoclave ha deciso di smettere di funzionare e domani è il mio ultimo giorno (poi sarò via per 3 settimane...) come devo fare? Usare TE non autoclavato?o posso tenere il plasmide su carta fino a quando non torno? (e poi dovrei tenerlo RT, 4°C o -20°C???)Please help!

SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Città: Los Angeles


955 Messaggi
Inserito il - 04 agosto 2011 : 17:19:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
puoi usare anche acqua o TE non autoclavato
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Patrizio
Moderatore

mago

Città: Barcellona


1912 Messaggi
Inserito il - 04 agosto 2011 : 20:19:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se non hai niente di autoclavato usa l'elution buffer di qualche kit , tanto è cmq ddH2O e TE

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Martin.diagnostica
Utente Attivo

H. pylori



1582 Messaggi
Inserito il - 04 agosto 2011 : 23:49:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Martin.diagnostica Invia a Martin.diagnostica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
puoi anche filtrarlo, per curiosità ci descrivi il protocollo
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immetella
Nuovo Arrivato

Dory

Prov.: Pescara
Città: Pescara


32 Messaggi
Inserito il - 05 agosto 2011 : 09:36:27  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di immetella Invia a immetella un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Il protocollo è abbastanza semplice, me lo ha passato una mia collega:
Mettere circa 400 ul TE autoclavato in una provetta con il pezzetto di carta 3mm che contiene il DNA e lasciare per 10-20 min a 37° per far sciogliere il DNA.*
Preparare una provetta per lo shock osmotico con 20 ul di KCM 5X, poi mettere circa 50 ng di DNA e arrivare a 100ul di volume finale con H2O.
Mescolare con 100 ul di batteri competenti.
Tenere 20 min in ghiaccio
10 min a temperatura ambiente.
Aggiungere l’LB (800ul) e mettere 1h a 37°C in termostato per crescere.
Piastrare su piastra Petri con Ampicillina.

Io mi fermerei qui* e poi il resto lo faccio quando torno in lab...
Cmq giusto per aggiornarvi, sembra che l'autoclave sia ripartita quindi se tutto va bene oggi posso procedere con l'estrazione e farmi le ferie in santa pace
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