Salve ragazzi, avrei un problema. Da una PCR ho ottenuto la sequenza di cDNA parziale di un gene non ancora descritto. Quindi non ho la sequenza completa di questo gene. A questo punto dovrei lanciare una ricerca di questo frammento di cDNA contro una libreria EST specifica per Triticum per vedere se trovo qualcosa e poi provare a ricostruire il gene sulla base delle sequenze EST disponibili, sfruttando le regioni di overlap. Ma come si fa? Cioè come faccio a lanciare la ricerca delle EST che contengono il mio frammento? Non ho mai fatto cose del genere. Please...
Ti occorre la sequenza che hai isolato in formato FASTA, e la butti contro il database delle EST del tuo organismo. Con le EST trovate fai un clustalw assieme alla tua sequenza, in questo modo se sei fortunata allunghi al 3' e al 5' il tuo frammento.
"l'unica differenza tra me e un pazzo è che io non sono pazzo!" Salvador.Dalì