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 Race (rapid amplification of cDNA ends)
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BioMol11
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18 Messaggi

Inserito il - 12 settembre 2011 : 17:59:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di BioMol11 Invia a BioMol11 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti qualcuno saprebbe spiegarmi in che cosa consiste la Race... Il mio testo fa molta confusione e non riesco a comprendere bene i passaggi!! Spero che qualcuno mi possa aiutare Grazie

nenne
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 12 settembre 2011 : 18:50:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di nenne Invia a nenne un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao la race serve essenzialmente ad amplificarti le estremita terminali del tuo cDNA.
si basa sull'utilizzo di 2 primers: uno universale e uno gene-specifico.
per la race al 3':
si sfrutta la cosa di poliA dei mRNA quindi utilizzi prima un primers universale poliT,trascrittasi inversa e hai il Cdna con coda d piliT, poi utilizzi il primers gene-specifico x il cDNA ottenuto e avrai cosi un cDNA a DS. infine tramite l'utilizzo dei 2 primers utilizzati effettui una PCR e avrai l'amplificazione.
per la race al 5':
nn avendo delle regioni caratteristiche sfruttabili, come prima cosa utilizzi un primer gene-specifico il possibile a monte vicino all'estremita 5' ottenendo un cDNA della porzione 5'.successivamente tramite una terminal trasferasi costruisci una coda di C all'estremita 3' in modo da convertire il cDNA a SS in doppio tramite un primer complementare alla coda d C che hai attaccato all'estremita 3'. e poi come prima riutilizzi i due primers e avrai amplificazione del frammento.
spero che tu abbia...
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BioMol11
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18 Messaggi

Inserito il - 13 settembre 2011 : 16:06:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di BioMol11 Invia a BioMol11 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille ora Ŕ molto pi¨ chiaro...
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