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pasqualep.
Nuovo Arrivato
Prov.: NA
Città: C/MARE DI STABIA
12 Messaggi |
 Inserito il - 14 settembre 2011 : 10:45:43
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Ciao ragazzi,
vi vorrei chiedere cortesemente aiuto circa un dubbio su una tecnica di transgenesi. o meglio un argomento di transgenesi. Sto studiando le varie tecniche di ricombinazione omologa, le ricombinasi sito-specifiche ecc ecc.... Ho studiato poi le tecniche trapping e l'uso delle staminali e del trasferimento nucleare. A un certo punto però la prof parla di animali come bioreattori in maniera da far esprimere magari una proteina eterologa (farmaco, un ormone come l'insulina ecc ecc) nelle mammelle delle pecore o magari nell'albume dell'uovo di polli. In queste tecniche tuttavia non riesco a trovare il modo per capire a priori se l'integrazione è produttiva... mi spiego: se per puro caso (nelle mucche non può succedere ma faccio un esempio che può andare anche bene per il trasferimento nucleare)ho delle staminali di mucca e magicamente riesco a coltivarle e poi a transfettarle, faccio il test su neomicina magari e mi selezioni chi ha il transgene e chi no... e fin qui ci sono. Ma chi mi dice che il gene X di interesse si esprimerà sicuramente nelle mammelle? Cioè anche se nel costrutto mio uso un promotore o un enhancer che si esprimerà in quel tessuto e con un segnale mi porto la proteina di interesse nel latte io potrò saperlo solo da adulti se l'integrazione è produttiva o meno... giusto? Perchè in tal caso anche se nel mio costrutto sotto lo stesso enhancer e promotore ci metto una GFP, essendo gli elementi regolativi tessuto specifici comunque mi si attiveranno quando la mammella è sviluppata... Quindi tenendo ciò premesso, come faccio a capire gli animali produttivi o meno? L'unico vantaggio rispetto all'iniezione nell'embrione già sviluppato che io ci vedo è la selezione su neomicina con cui so solo però se il vettore c'è o meno... mentre gli unici vantaggi che io vedo rispetto all'iniezione dei pronuclei sono lo stesso che per l'embrione e in più il fatto che i pronuclei poi richiedono particolari metodologie per portare avanti l'embrione ottenuto... Che mi rispondete? Ah e quanto detto per il controllo di sicura produzione a quanto ho capito si ottiene comunque sempre a valle anche nel trasferimento nucleare??!!
Grazie in anticipo!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 14 settembre 2011 : 13:19:37
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| Avrai fatto dei test in cui avrai aspettato che gli animali fossero adulti, e poi una volta che sei sicuro che il promotore funziona sei a posto, se il transgene è integrato verrà espresso in quel tessuto. |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 14 settembre 2011 : 13:37:14
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Come dice Chick80, dovrai effettuare uno screening su animali adulti, allo stadio e nei tessuti in cui si presume che questo transgene sia espresso. L'integrazione nel DNA genomico non ti da infatti sufficiente garanzia che questo venga espresso e talvolta nemmeno che venga trasmesso nella progenie (quando si tratta di mosaici).
Quindi in parole povere aspetti che la tua mucca sia matura per produrre il latte, prendi il latte e controlli la presenza della sua proteina. Una volta fatto cio' separi le mucche positive da quelle negative e ti costruisci le varie linee da queste. |
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pasqualep.
Nuovo Arrivato
Prov.: NA
Città: C/MARE DI STABIA
12 Messaggi |
Inserito il - 17 settembre 2011 : 15:37:10
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come al solito you're the best one |
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animali trans
Didattica e Relazioni
