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ning
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2 Messaggi

Inserito il - 26 settembre 2011 : 10:52:34

Salve a tutti ragazzi/e, mi servirebbe un consiglio sulla tecnica da usare per isolare il 5' di un gene.
Ho letto un po in giro e la 5' race classica mi pare la soluzione pi� semplice quindi vorrei vedere se ho capito bene la tecnica e ottenere qualche informazione sulle possibilit� di riuscita perch� vedo un sacco di kit in giro...

allora vediamo se ho capito:
1) retrotrascrivo il mio mRNA usando solo il primer specifico del mio gene
2)degrado l'mRNa rimasto (5min a 85� ? RNase?)
3) purifico il mio cdna (colonnine per purificare l'amplificato tipo quelle promega?)
4)aggiungo la coda di poli C con la terminal transferase
5)faccio una prima PCR anchor primer- primer specifico 1
6) faccio una nested anchor primer- primer specifico 2 pi� interno

mi affido alla vostra esperienza per conquistare il I esone che essendo composto solo da due amminoacidi nella sequeza genomica non riesco ad individuare..

grazie
ciaooo