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Francy87
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 26 settembre 2011 : 18:21:21
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Ciao a tutti!!
sono una studentessa di scienze biologiche,
volevo sapere se qualcuno sa come preparare un loading buffer a base esclusiva di glicerolo per eliminare il fondo dovuto ai coloranti che sio osserva nell'analisi d'immagine di un gel.
Ho visto che solitamente il glicerolo è al 30%, la concentazione di partenza è 1 M?
Grazie mille!!!
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 26 settembre 2011 : 18:28:23
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| la concentrazione di partenza del glicerolo sarà del 100% |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 26 settembre 2011 : 21:10:33
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| mi sembra un esagerazione 100% glicerolo,. non si riesce neanche a pipettare tanto che è viscoso |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 26 settembre 2011 : 22:05:02
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| ma scusa il glicerolo come te lo vendono quanto è? |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 26 settembre 2011 : 23:53:39
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| vicino al 100% per i calcoli va bene l'approssimazione, ma si utilizza diluito nei buffer. Non ricordo con precisione ma quando purificavo proteine ricombinate e l'utilizzavo come crioprotettore credo che arrivavo al 70% massimo |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2011 : 00:10:34
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| eh ma infatti, siccome lei chiiedeva la concentrazione di partenza io pensavo si riferisse allo stock, al bottiglione che ha conc. 100% (99 e qualcosa in realtà). Poi è chiaro se usa delle diluizioni intermedie si riaggiusta il calcolo per ottenere la diluizione al 30%, questo è ovvio |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2011 : 00:12:15
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Martin non stiamo a cercare il pelo nell'uovo, il glicerolo te lo vendono in genere >99% (ad es. Glycerol - Sigma), comunque va benissimo considerarlo 100% per fare i conti di quanto utilizzarne.
@Francy87: il loading buffer senza coloranti lo prepari esattamente allo stesso modo di quello con i coloranti, semplicemente escludendo i coloranti. Le quantità di glicerolo generalmente utilizzate sono tra 30-60%.
Se vuoi utilizzare comunque un tracciante che non dia molto fastidio per l'acquisizione dell'immagine ti consiglio l'orange G, è molto tenue e migra molto in basso, quindi in genere non da fastidio. |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2011 : 00:22:14
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Citazione:
Messaggio inserito da GFPina
Martin non stiamo a cercare il pelo nell'uovo, il glicerolo te lo vendono in genere >99% (ad es. Glycerol - Sigma), comunque va benissimo considerarlo 100% per fare i conti di quanto utilizzarne.
siamo d'accordo io non ho mai contestato l'approssimazione del calcolo
Citazione:
vicino al 100% per i calcoli þva bene l'approssimazione, ma si utilizza diluito nei buffer. Non ricordo con precisione ma quando purificavo proteine ricombinate e l'utilizzavo come crioprotettore credo che arrivavo al 70% massimo
ma l'utilizzo del loading buffer a base esclusiva di glicerolo, poi se avete i soldi per tarare le gilson 1 volta al mese tanto meglio per voi. |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2011 : 00:29:50
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ma in realtà, come ha già sottolineato GFPina, il glicerolo è diluito come negli altri buffer, solo nn vengono messi i coloranti, in questo senso viene inteso "a base esclusiva". Comunque dove vedi il problema nel pescare il glicerolo con la gilson? Basta armarsi di un pochinino di pazienza e di un puntale tagliato, o, per chi ha un po' + soldi da spendere, di queste:
http://www.gilson.com/en/Pipette/Products/53.224/#.ToD8ptRrWTA
Io le ho provate e sono fantastiche (e ti tirano su il glicerolo in un batter d'occhio) |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2011 : 00:40:05
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scusate, rileggendo il post iniziale mi accorgo che avevo capito male, pensavo che si volesse prep un buffer 100% glicerolo; mi ha tratto in inganno la parolina base esclusiva.
Spem credo che siamo tutti d'accordo che pipettare di precisione liquidi viscosi è un problema, tanto è vero che come hai "linkato" esistono pipette specifiche |
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Francy87
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 27 settembre 2011 : 10:39:46
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Grazie mille per le risposte!!
effettivamente la concentrazione stock è del 99.5% e noi la porteremo al 30%.
Poi porto a volume con H2Odd?
@GFPina: Grazie del consiglio sull'orange G,ci proverò!! |
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