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paolo.ranieri89
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
 Inserito il - 18 ottobre 2011 : 19:03:05
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ragazzi scusate qualcuno potrebbe dirmi quale terreno di coltura posso usare per selezionare un prototrofo da un ceppo di E.coli auxotrofo per la leucina e perchè è bene usare proprio quel terreno? grazie
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paolo.ranieri89
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2011 : 16:27:26
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| vi prego aiutatemi!!vorrei capire almeno il meccanismo non vi chiedo di risolvermi l'eserczio.. |
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2011 : 18:48:34
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| Se vuoi selezionare un batterio (colonia) che non ha bisogno di leucina per crescere, prototrofo quindi, piastrerai i tuoi batteri di partenza in un terreno privo di leucina (leu-). No? |
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paolo.ranieri89
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2011 : 19:05:55
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| si a quello c'ero arrivato anke io..mi chiedevo quali fossero tutti gli altri componenti di tale terreno ovviamente privo di leucina |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2011 : 19:10:02
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| credo ke saranno semplicemnte i tipici componenti di un terreno batterico (zuccheri\peptoni, sali ecc... |
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2011 : 19:39:27
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| Scusa se sono scaduto nel banale, ma tu avevi chiesto espressamente il "meccanismo" della cosa, e di quello si tratta, il resto è l'esecuzione. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2011 : 21:08:48
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Prova a ragionarci un po' su, non per cattiveria ma perchè qua preferiamo aiutare le persone a ragionare che non fornire le soluzioni e basta.
A lezione dovrebbero averti fornito tutti gli elementi, abbiamo già stabilito che non devi mettere leucina, poi secondo te cosa dovrai mettere di essenziale?
(aiuto: sai la differenza tea terreno minimo e terreno completo?)
Secondo te metterai nel terreno anche peptoni? Perchè?
Prova a rispondere a queste domande.
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paolo.ranieri89
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2011 : 21:38:18
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Citazione:
Messaggio inserito da GFPina
Prova a ragionarci un po' su, non per cattiveria ma perchè qua preferiamo aiutare le persone a ragionare che non fornire le soluzioni e basta.
A lezione dovrebbero averti fornito tutti gli elementi, abbiamo già stabilito che non devi mettere leucina, poi secondo te cosa dovrai mettere di essenziale?
(aiuto: sai la differenza tea terreno minimo e terreno completo?)
Secondo te metterai nel terreno anche peptoni? Perchè?
Prova a rispondere a queste domande.
il mio corso diciamo che è un ibrido tra microbiologia generale e medica, quindi non hanno spiegato cose troppo nel dettaglio..ho visto però su test vecchi che questa domanda è ricorrente e dunque volevo chiedere un'aiuto..cosi in base alle mie conoscenze posso dire che trattandosi di E.coli il terreno sarà sicuramente minimo, poichè l'attività biosintetica di questo batterio è alquanto elevata e riesce a formarsi da solo i nutrienti di cui ha bisogno..dunque direi terreno minimo, sali minerali, glucosio e ovviamente niente leucina..i peptoni credo non siano presenti perchè come già detto il terreno è definito e non complesso come potrebbe essere nel caso di lieviti o patogeni..basandomi su ciò che ho studiato mi verrebbe da dire questo, il terreno non ha bisogno di altro? grazie |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2011 : 00:46:21
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Beh non c'e bisogno di andare nel dettaglio per rispondere a questa domanda!
Comunque è giusto, devi utilizzare un terreno minimo, quindi che contenga una fonte di carbonio (tipicamente uno zucchero, glucosio o altro), una fonte di azoto (possono essere ad es. sali inorganici) e sali minerali, non aggiungerai nessun aminoacido e di certo non la leucina.
Il motivo per cui non metti i peptoni in questo caso non è tanto il fatto che vuoi un terreno definito, ma semplicemente che i peptoni sono altro che catene di aminoacidi, se tra questi c'è la leucina ovviamente non potresti isolore un prototrofo da un autotrofo per la leucina! |
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paolo.ranieri89
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2011 : 12:01:21
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| grazie mille GFpina e dunque il ragionamento sarà lo stesso per qualsiasi altro aa giusto? se avessi detto tirosina o prolina il terreno sarebbe stato lo stesso |
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paolo.ranieri89
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 24 ottobre 2011 : 21:44:57
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| ragazzi ma scusate l'organismo auxotrofo non è quell'organismo che manca di un nutrienti e quindi bisogna aggiungerli? e dunque la leucina ci vuole non deve essere assente.. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 24 ottobre 2011 : 22:39:21
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Sì ma la domanda era:
Citazione:
Messaggio inserito da paolo.ranieri89
... quale terreno di coltura posso usare per selezionare un prototrofo da un ceppo di E.coli auxotrofo per la leucina ...
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paolo.ranieri89
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 25 ottobre 2011 : 09:53:55
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| ah e non si tiene conto del fatto che l'organismo è auxotrofo per la leucina? |
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 25 ottobre 2011 : 20:42:58
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| Ma credo proprio che la risposta ci sia già qualche reply sopra.. |
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paolo.ranieri89
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2011 : 13:16:16
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scusate ragà nel testo c'è scritto:
prototrofo da un ceppo di E.coli auxotrofo per la leucina..il ceppo di E.Coli è auxotrofo e dunque grazie a mutazione non ha leucina..se io voglio il prototrofo, cioè il wild type, non devo aggiungere leucina al terreno? |
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2011 : 15:00:09
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Citazione:
prototrofo da un ceppo di E.coli auxotrofo per la leucina
Scusa ma se metti Leu nel terreno lì cresceranno sia i prototrofi che gli auxotrofi...come fai a selezionare il prototrofo? |
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2011 : 15:47:30
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| fai crescere i batteri (suppongo si tratti di un mix di batteri che possono crescere senza leucina nel mezzo e batteri che NON crescono senza leucina) su 2 piastre: una contiene leucina e l'altra no. i batteri che crescono sul terreno con leucina ma che non riescono a crescere sul terreno senza leucina sono batteri auxotrofi. quelli che crescono sia con che senza leucina nel mezzo sono prototrofi. |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2011 : 20:44:19
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Citazione:
Messaggio inserito da roberta.s
fai crescere i batteri (suppongo si tratti di un mix di batteri che possono crescere senza leucina nel mezzo e batteri che NON crescono senza leucina) su 2 piastre: una contiene leucina e l'altra no. i batteri che crescono sul terreno con leucina ma che non riescono a crescere sul terreno senza leucina sono batteri auxotrofi. quelli che crescono sia con che senza leucina nel mezzo sono prototrofi.
si ma non è del tutto esatto perchè cosi non isoli
Un metodo protrerrebbe essere questo
1 fai crescere su piastra leu+
2 picchi per es 10 colonie e strisci ogni colonia su due piastre rispettivamente leu- e leu+
ovviamente le colonie che crescono in leu+ ma non i leu- sono quelle auxotrofi
Devi consumare un bel pò di piastre :D
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2011 : 23:38:47
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| no, ti bastano giusto due piastre (una leu+ e l'altra leu-): su ciascuna delle due disegni una griglia e in ogni posizione sulle due piastre "strisci" la stessa colonia. così puoi fare uno screen di almeno 60/70 colonie. soltanto dopo andrai a "strisciare" la colonia che ti interessa su una singola piastra per ottenere singole colonie. |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2011 : 23:42:07
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| io dividevo la piastra in tanti bei spicchi di torta coi clonaggi... ma più di 15 strisciate la vedo difficile |
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2011 : 23:50:09
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| ti bastano piccole strisciate (1 cm circa) per selezionare dei batteri su una piastra. io faccio disegno una griglia 10 x 10 su una classica piastra e mi trovo bene: è una metodo veloce che mi permette di analizzare centinaia di colonie utilizzando poco spazio. |
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 29 ottobre 2011 : 23:56:22
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| interessante tipo piastra per la conta che pazienza però che ci vuole un lavoro certosino :D |
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Ale_90
Utente Junior
296 Messaggi |
Inserito il - 30 ottobre 2011 : 00:17:09
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| Anche a me hanno insegnato il metodo di roberta.s, lo trovo molto metodico come approccio |
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 30 ottobre 2011 : 00:23:06
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| @martin :diciamolo, è proprio 'na palla!! |
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