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pasqualep.
Nuovo Arrivato
Prov.: NA
Città: C/MARE DI STABIA
12 Messaggi |
 Inserito il - 30 ottobre 2011 : 23:15:50
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Ciao a tutti, volevo chiedere delle informazioni riguardo una tecnica per creare un cDNA specifico, cosa poco usata a quanto pare... la mia domanda è questa: visto che comunque un RNA messaggero termina con un 3' solitamente poliA, come faccio ad amplificarmi tutto un RNA specifico a partire da un primer ovviamente antisenso ma senza perdere la poliA stessa? Ovvero se uso un oligodT amplifico tutti i poliA con la RT, ma se voglio retrotrascriverne un rna specifico cosa devo fare?
Poi altra domanda... in cosa consiste sempre per le cDNAteche l'uso di adattatori col 5'OH quindi defosforilato? E cosa si intende alla fine di questa tecnica usare un vettore defosforilato? Per quel che ne ho capito io si parte da adattatori che si legano al mio ibrido iniziale RNA DNA, poi fosforilo anche il 5'OH con una T4 chinasi e poi clono in vettori defosforilati... ma onestamente mi sfugge il succo della tecnica ovvero come arrivo al cDNA vero a doppio filamento a DNA e come si uniscono i vari passaggi del protocollo per dargli un senso logico. Spero di non esser stato troppo confuso nello spiegarmi o almeno spero meno confuso di come sono di fronte a questa tecnica.
So di aver scritto in maniera un pò sgrammaticata ma perdonatemi... sono le 23.15 (in realtà 24.15 visto che solo stanotte si è messa un'ora indietro).
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