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Limpet
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Inserito il - 09 novembre 2011 : 15:37:25  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Limpet Invia a Limpet un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho letto che avete già fatto una discuzzione simile, ma vorrei sopporvi il mio caso.
Parto da campioni conservati a - 20°C; in passato ho già estratto con successo DNA con trizol, le modifiche da apportare sono riportate sul datasheet dell'invitrogen (la casa produttrice) la quale dice, ovviamente, alla fase di separazione, di eliminare la fase acquosa, che contiene RNA, e di processare il resto: interfaccia (proteine e dna) e fase organica (DNA). Fatto questo, questa volta,però, non mi viene niente!! l'unica modifica è che non lavoro con centrifuga a 4°C. Ma trattandosi di DNA non dovrebbe importarmi visto che quando uso il buffer classico di estrazione con i solventi organici (che però mi fa perdere una cofana di tempo) non la uso mai.Può influenzarmi la resa, al massimo lo vedrei degradato, ma invece, non estraggo niente!
idee..?
merci!

Limpet
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83 Messaggi

Inserito il - 10 novembre 2011 : 00:23:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Limpet Invia a Limpet un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non mi abbandonate!!!
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Limpet
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83 Messaggi

Inserito il - 11 novembre 2011 : 12:29:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Limpet Invia a Limpet un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
la storia continua...

Sono riuscita a estrarre, però solo RNA!!e non lavoro a 4°C, senza accortezze di puntali con filtro, guanti etc; ma alla quantizazzione su gel escono solo le bande di RNA, mistero...
dov'è il mio DNA??
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Limpet
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
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83 Messaggi

Inserito il - 16 novembre 2011 : 22:18:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Limpet Invia a Limpet un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
....ok forse sono giunta a una soluzione, anche se solo ipotetica e soprattutto perchè mi sono rotta...Questo trizol l'ho avuto da una collega (che non posso contattare) in una falcon, con scritto solo TRIZOL, per conservare dei campioni a -80°C; il dubbio/chiarimento ultimo è: esiste un tipo di trizol che mi impedisce di isolare il DNA??? so che ne esistono più tipi...quindi? ne sapete qualcosa?

sempre io, sempre grazie
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Moloney
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111 Messaggi

Inserito il - 19 novembre 2011 : 00:12:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Moloney Invia a Moloney un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Mi pare altamente improbabile... Comunque per risolvere la questione dovresti dire di preciso da che cellule o tessuto parti, se quello che è congelato a -20° è il campione in trizol o altro; quale metodo utilizzi dopo aver scongelato il campione per estrarre il DNA, ecc ecc...
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Limpet
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
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83 Messaggi

Inserito il - 20 novembre 2011 : 11:15:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Limpet Invia a Limpet un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
prendo il protocollo e ti rispondo per bene,
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