| Autore |
Discussione |
|
|
Dolly
Nuovo Arrivato
17 Messaggi |
 Inserito il - 20 novembre 2011 : 19:44:52
|
Ciao a tutti!
Ho qualche problema con questo tipo di PCR in particolare sulla teoria, spero possiate aiutarmi.
Devo clonare un cDNA da un singolo mRNA la cui sequenza è nota,pertanto comincio con il convertire l'mRNA in DNA utilizzando la trascrittasi inversa. Si utilizza questo enzima per ottenere un DNA a singolo filamento a partire da mRNA poi utilizzo un INNESCO per trasformare il DNA a singolo filamento in DNA a doppio filamento.
-In parole proprio semplici cos'è l'innesco? dove lo prendo o come lo faccio??
A questo punto faccio la PCR tradizionale per amplificare il cDNA (che è a doppio filamento quindi lo posso chiamare duplex) lo scaldo separo i filamenti....poi aggiungo i PRIMER.
-Cosa sono i Primer?????
- Un' ultima cosa; ho letto che quando faccio la PCR devo aggiungere i DEOSSINUCLEOTIDI cosa sono??? mi fate un esempio? grazie 1000!!!!!
|
|
|
|
|
0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 20 novembre 2011 : 20:33:44
|
Una domanda provocatoria: su che testo stai studiando?
No, perché su qualsiasi manuale le domande che poni trovano facilmente risposta. E non sapere cos'è un primer (o un innesco, che ne è la traduzione italiana) significa non conoscere, o non avere compreso, neppure la replicazione del DNA negli eucarioti.
Perdona il tenore del post se lo ritieni offensivo, non intendo assolutamente essere rude o sgarbato. Voglio solo porre l'accento sul fatto che poni domande che possono essere risolte rapidamente aprendo un libro, mentre ad un qualsiasi utente richiederebe la stesura di un testo abbastanza lungo e noioso, dovendo contenere praticamente le basi, che evidentemente ti mancano.
Se permetti un consiglio, nel caso in cui fossi sprovvisto di un testo, inizia leggendo wiki.en. Inoltre non dimenticare che tra le pagine del forum si celano discussioni preziose da cui attingere informazioni utili. Usa la funzione "Cerca" nella colonna di sinistra per incominciare la ricerca (perdonate se sono stato un po' pleonastico).
Se poi qualche dubbio persiste, allora si può parlarne tranquillamente qui.
|
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
|
 |
|
|
0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 20 novembre 2011 : 20:37:40
|
Aggiungo che quando fai la PCR non usi deossinucleotidi.
I deossinucleotidi, ossia nucleotidi mancanti della funzione ossidrilica in posizione 3', necessaria all'allungamento della catena, vengono usati nel sequenziamento di Sanger. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
|
|
|
|
roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 20 novembre 2011 : 20:44:21
|
Io mi sento in dovere di sostenere il ragionamento di 0barra1. Questo forum, che ritengo essere davvero di buon livello, deve essere visto come una possibilità di confronto intelligente, e non un mezzuccio per colmare carenze di contenuti basilari che non possono essere accettate. Tra l'altro è di scarso interesse trovare "discussiioni" di questo livello, piuttosto che gli stimolanti topic a cui siamo abituati.
Non é un'offesa, anzi, trovo sarebbe molto più offensivo rispondere ad una domanda a cui si puó trovare facile risposta da sè tramite la semplice consultazione di un testo.
|
|
|
|
Dolly
Nuovo Arrivato
17 Messaggi |
Inserito il - 20 novembre 2011 : 21:10:20
|
Ciao Roberta ti chiedo scusa per averti offeso con le mie domande che per me, essendo al primo anno senza neanche un libro di testo ma solo appunti di laboratorio, non sono poi così insulse.
Mi permetto anche di dirti che è sciocca la tua frase sullo scarso interesse della discussione perché questo è un forum dove gli studenti universitari di facoltà scientifiche espongono i loro dubbi sperando che qualcuno che se ne intende risponda, chiarendogli le idee. Non mi sembra che tutte le altre discussioni di questo forum riguardino nuove scoperte.
Per Obarra1 invece ti ringrazio,mi hai risposto gentilmente consigliandomi. Hai ragione sul fatto che non ho la basi chiare devo provvedere, è solo che essendo appena entrata nel mondo scientifico mi sembrano difficili anche cose che una persona che se ne intende di più ritiene basi semplici ed essenziali |
|
|
|
roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 20 novembre 2011 : 23:26:08
|
| Mi dispiace per la poca chiarezza: intendo sia un'offesa a TE se qualcuno tu risponde ad una domanda a cui puoi arrivare da sola! Non vedo cosa ci sia di male |
|
|
|
roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 21 novembre 2011 : 17:39:49
|
| PS: i dideossinucleotidi (ddNTPs) si usano per il sequenziamento sanger; sono quelli che arrestano la reazione di allugamento del DNA per permetterci di capire che nucleotide c'è in ogni posizione. I deossinucleotidi (dNTPs) si usano appunto per le PCR: servono a formare lo scheletro dei nuovi filamenti di DNA |
|
|
| |
Discussione |
|
RT-PCR
Siti Scientifici
