western blotting su paraffinato

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nicogy77
Nuovo Arrivato

6 Messaggi

Inserito il - 05 dicembre 2006 : 15:09:13

Ciao a tutti!!!!
ho una serie di domande da porvi: è possibile fare un western blotting di omogenati ottenuti da pezzi in paraffina????
Se si, come si devono sparaffinare??è giusto usare i soliti protocolli di sparaffinatura??Eventuali tracce di paraffina possono interferire nel dosaggio proteico (Lowry-Folin)?
Vi ringrazio anticipatamente...
BUONA GIORNATA A TUTTI

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 05 dicembre 2006 : 20:55:59

Non l'ho mai fatto, ma io ti consiglierei di sparaffinare il tessuto.

Una cosa che potresti fare è prendere un tessuto fresco, dividerlo in 3 parti uguali e metterne due parti in paraffina. Poi provi a fare il western con tessuto fresco, in paraffina e sparaffinato e vedi se ci sono differenze.

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GFPina
Moderatore

Città: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 06 dicembre 2006 : 15:25:51

Un mio collega doveva provare ma non l'ha ancora fatto quindi non so dirti se funziona bene!
Sicuramente devi sparaffinarli e ti consiglierei di usare "i soliti protocolli di sparaffinatura" e di sciacquare molto bene per elimirare la paraffina, non so però se interferisca nel dosaggio delle proteine