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lalauretta
Nuovo Arrivato
Prov.: Bz
Città: Bolzano
25 Messaggi |
 Inserito il - 24 gennaio 2012 : 19:07:29
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Ciao ragazzi,
scusate, ma sto impazzendo... penso di essermi persa in un bicchiere d'acqua, ma non riesco ad uscirne...
sto cercando di tagliare un gene da un plasmide ma l'unica informazione che ho mi dice solo "The construct is engineered with a "PmeI" on the 5' and NotI on the 3' prime. Cloning site: fused EcoRV/PmeI at 5' and Not I at 3', RV and PmeI were deleted."
ma cosa vuol dire??
Grazie in anticipo e scusate la banalità
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 24 gennaio 2012 : 23:20:02
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| Non capisco molto bene la frase in inglese, scusa. Però io guarderei piuttosto la mappa del plasmide. Di certo hai la sequenza di quest'ultimo, per cui puoi ricavare da te tutte le info di cui hai bisogno, come i siti di restrizione presenti al 5' ed al 3' dell'inserto che vuoi ottenere per digestione. Hai provato? |
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 24 gennaio 2012 : 23:35:57
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Secondo me significa che il costrutto l'hanno tagliato PmeI(blunt)/Not, invece il costrutto EcoRV(blunt)/Not, quindi hanno clonato l'inserto nel costrutto, in questo modo hai che i due estremi blunt si sono legati da un lato (creando un nuovo sito che non è più riconosciuto nè da Eco nè da Pme, quindi è andato perso) e i due estremi Not dall'altro.
Chiaro? |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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lalauretta
Nuovo Arrivato
Prov.: Bz
Città: Bolzano
25 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2012 : 12:04:00
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molto molto chiaro, grazie mille... :) però guardando alla mappa Not è contenuto all'interno della sequenza del gene poco prima (9457) del codone di stop (9511)... quindi come possono aver tagliato con Not?
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lalauretta
Nuovo Arrivato
Prov.: Bz
Città: Bolzano
25 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2012 : 12:19:19
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| AH e oltretutto nella sequenza del gene c'è un sito PmeI dopo NotI e prima del codone di stop (9502)... sono super confusa!! sorry!! |
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2012 : 13:02:27
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Vuoi dire che all'estremità 3' del tuo gene, prima che esso termini, ci sono i siti per PmeI e NotI??
Puoi provare a scrivere uno schemino del gene all'interno del plasmide? Del tipo:
sito/i x -- parte 5' del gene Y -- sito/i y -- parte 3' del gene Y -- sito/i z
Per tagliar via il tuo gene devi scegliere 2 siti che siano UNICI e ESTERNI al suddetto gene |
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
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lalauretta
Nuovo Arrivato
Prov.: Bz
Città: Bolzano
25 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2012 : 13:53:43
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grazie ragazzi...
riguardando tutto ho capito... praticamente è vero che il gene contiene un sito NotI e non il codone di stop, ma in pratica il plasmide contiene il sito NotI e tutta la sequenza finale fino al codone di stop! Non so perchè non ho controllato subito questa cosa!! come detto mi stavo perdendo in un bicchiere d'acqua!
mi spiace avervi fatto perdere tempo, grazie mille per avermi risposto!
Buona giornata a tutti! |
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