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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
 Inserito il - 09 febbraio 2012 : 21:18:07
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Metti su una piastra, che chiamerò A, contenente terreno di crescita per lieviti le colonie di cui vuoi testare il fenotipo. La piastra A contiene un terreno su cui ogni lievito può crescere, per cui metti la piastra A nell'incubatore a 30°C e aspetti le colonie crescano.
Poi prendi un supporto apposito della stessa forma e dimensione delle piastre e ci sistemi sopra un pezzo di tessuto tipo velluto. A questo punto trasferisci le colonie dalla piastra A al tessuto, che userai come "timbro".
Dopodichè non farai altro che mettere sul velluto le piastre di interesse per verificare il fenotipo delle colonie. Esempio: vuoi vedere se le colonie sono in grado di crescere su un terreno che manca di triptofano, ovvero se hanno il gene responsabile della sintesi del triptofano in versione wild type? Metti la piastra con terreno che non contiene triptofano (trp-) sul velluto, in modo da trasferirvici le colonie da testare e poi incubi la piastra trp- a 30°C. Il giorno dopo analizzi questa piastra. Se le colonie sono cresciute, vuol dire che sono in grado di crescere in assenza di trp, per cui sono TRP+. Se non crescono, vuol dire che hanno una mutazione nel gene TRP, per cui non sono in grado di effettuare uno o più step della biosintesi del triptofano.
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