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moni89
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dna


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Inserito il - 15 febbraio 2012 : 12:03:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di moni89 Invia a moni89 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve! Ho letto una discussione presente sul forum su questo argomento ma mi rimane un dubbio: quando dite che bisogna allestire la PCR con 3 diversi primers (uno per il wt, uno per il mutato e l'altro comune) parlate di tre coppie di primers (wt/wt; m/m e wt/m) oppure dei tre singoli primers che vengono tutti aggiunti alla stessa miscela di reazione??

0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


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Inserito il - 15 febbraio 2012 : 12:15:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Farai per es. primer Forward specifico per allele A, primer Forward specifico per allele a, primer reverse in comune tra i due. Il tutto nella stessa reazione. Cosi' eviti di condurre due diverse PCR, come invece accade per la ASO.
Solo uno dei due primer forward (in casi di omozigositā) potrā amplificare ed in base a come i prodotti di PCR sono marcati (perché i primer Forward saranno marcati in maniera diversa, magari con due diversi fluorofori) trarrai le tue conclusioni (omozigote A/A, omozigote a/a). Se ottieni entrambi i segnali (es. emissione a due diverse lunghezze d'onda), allora sei in un caso di eterozigositā.

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss

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moni89
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dna



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Inserito il - 16 febbraio 2012 : 16:08:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di moni89 Invia a moni89 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Quindi praticamente l'unica differenza con la ASO č che metto tutto insieme e non faccio due reazioni distinte?? I primers sono sempre quelli...
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0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


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Inserito il - 16 febbraio 2012 : 16:09:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
...ma marcati per rendere distinguibili gli amplificati.

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moni89
Nuovo Arrivato

dna



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Inserito il - 16 febbraio 2012 : 16:33:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di moni89 Invia a moni89 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ti ringrazio!
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moni89
Nuovo Arrivato

dna



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Inserito il - 17 febbraio 2012 : 18:06:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di moni89 Invia a moni89 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusami mi sorge un dubbio: ma se ho per esempio un caso di eterozigosi, il DNA amplificato (mutato e wild type) non co-migra nel gel? Come faccio a distinguere i due diversi segnali? L'altezza della banda non č sempre la stessa? o meglio, non dovremmo avere un'unica banda?
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0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 17 febbraio 2012 : 18:24:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da 0barra1

...ma marcati per rendere distinguibili gli amplificati.


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moni89
Nuovo Arrivato

dna



60 Messaggi

Inserito il - 21 febbraio 2012 : 19:08:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di moni89 Invia a moni89 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
giusto.. grazie!
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