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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
 Inserito il - 15 febbraio 2012 : 12:03:44
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Salve! Ho letto una discussione presente sul forum su questo argomento ma mi rimane un dubbio: quando dite che bisogna allestire la PCR con 3 diversi primers (uno per il wt, uno per il mutato e l'altro comune) parlate di tre coppie di primers (wt/wt; m/m e wt/m) oppure dei tre singoli primers che vengono tutti aggiunti alla stessa miscela di reazione??
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0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 15 febbraio 2012 : 12:15:54
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Farai per es. primer Forward specifico per allele A, primer Forward specifico per allele a, primer reverse in comune tra i due. Il tutto nella stessa reazione. Cosi' eviti di condurre due diverse PCR, come invece accade per la ASO.
Solo uno dei due primer forward (in casi di omozigositā) potrā amplificare ed in base a come i prodotti di PCR sono marcati (perché i primer Forward saranno marcati in maniera diversa, magari con due diversi fluorofori) trarrai le tue conclusioni (omozigote A/A, omozigote a/a). Se ottieni entrambi i segnali (es. emissione a due diverse lunghezze d'onda), allora sei in un caso di eterozigositā. |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
Inserito il - 16 febbraio 2012 : 16:08:20
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| Quindi praticamente l'unica differenza con la ASO č che metto tutto insieme e non faccio due reazioni distinte?? I primers sono sempre quelli... |
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0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 16 febbraio 2012 : 16:09:20
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| ...ma marcati per rendere distinguibili gli amplificati. |
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A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
Inserito il - 16 febbraio 2012 : 16:33:26
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| Ti ringrazio! |
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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
Inserito il - 17 febbraio 2012 : 18:06:35
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| Scusami mi sorge un dubbio: ma se ho per esempio un caso di eterozigosi, il DNA amplificato (mutato e wild type) non co-migra nel gel? Come faccio a distinguere i due diversi segnali? L'altezza della banda non č sempre la stessa? o meglio, non dovremmo avere un'unica banda? |
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0barra1
Utente Senior
Cittā: Paris, VIIčme arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 17 febbraio 2012 : 18:24:20
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Citazione:
Messaggio inserito da 0barra1
...ma marcati per rendere distinguibili gli amplificati.
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A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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moni89
Nuovo Arrivato
60 Messaggi |
Inserito il - 21 febbraio 2012 : 19:08:35
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| giusto.. grazie! |
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Discussione |
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Cop-PCR (Oligopriming competitivo)
Didattica
