Gene targeting in cellule umane con IDLV o baculovirus

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sofia1988
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 22 marzo 2012 : 15:13:32

So che vettori di lentivirus integrasi diffettivi (IDLV) diminuisco di molto gli eventi di integrazione casuale nel genoma ospite, tuttavia � noto che non eliminano del tutto il rischio di tali eventi indesiderati. In un articolo che ho letto � stato dimostrato che questi eventi rari di integrazione possono essere dovuti a ricombinazione casuale di fondo e non tanto a retromutazione del gene mutato per l'integrasi. Un altro articolo proponeva un lavoro di gene targenting usando baculovirus invece di IDLV per evitare il problema dell'integrazione dei retrovirus. Il mio dubbio �: se l'integrazione di IDLV � dovuto a eventi causali di ricombinazione di fondo non mediato dall'integrasi, allora anche il vettore baculovirus pu� subire questi eventi di ricombinazione casuale; allora perch� un sistema basato su vettori di baculovirus dovrebbe essere pi� sicuro di quello IDLV?

Dionysos
Moderatore

Citt�: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 22 marzo 2012 : 15:38:14

Infatti non mi pare sia affatto dimostrato che l'integrazione casuale degli IDLV possa
comportare dei "rischi" dal punto di vista mutagenico o genotossico. Hai trovato referenze a riguardo?

Gli IDLV si inseriscono causalmente allo stesso modo in cui puo' farlo un plasmide o un episoma,
con la differenza che alcuni genomi virali episomali sono naturalmente destinati a rimanere in
una forma extracromosomica (e.g. gli adenovirus), magari perch� cromatinizzano in un certo modo.
Gli LTR-circles formati dai lentivirus sono naturalmente destinati a integrarsi, ma negli IDLV
non possono farlo in maniera catalizzata (e quindi guidata) perch� il sito attivo dell'integrasi
� mutato. Non possiamo escludere che abbiano comunque una intrinseca propensione a dirigersi
verso i cromosomi, visto il loro "natural destino". Tuttavia non ricordo sia mai stato dimostrato.

Volere libera : questa � la vera dottrina della volont� e della libert�
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!

batsake89
Nuovo Arrivato

Prov.: bari
Citt�: andria

12 Messaggi

Inserito il - 14 agosto 2012 : 01:56:45

Perdonate la domanda banale: ma i fenomeni di ricombinazione casuale a cosa sono dovuti? A DSB (double strand breaks) che vengono riparati per ricombinazione omologa tra il DNA genomico e il vettore?
Questo dubbio mi ricollega ad un'altra domanda: nel gene targeting, cosa rende possibile la ricombinazione omologa tra il vettore e il DNA genomico? Si deve attendere un evento di ricombinazione casuale? o c'� un modo per far avvenire la ricombinazione senza dover aspettare eventi casuali?

Dionysos
Moderatore

Citt�: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 15 agosto 2012 : 17:26:12

Citazione:
o c'� un modo per far avvenire la ricombinazione senza dover aspettare eventi casuali?

Electroporation

or

http://en.wikipedia.org/wiki/Zinc_finger_nucleases

:)