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joleee80
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
24 Messaggi |
 Inserito il - 19 dicembre 2006 : 22:26:00
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Ragazziiii.....una domanda???
quale è l'ordine di migrazione di un vettore plasmidico
su un gel di agarosio....in termini di peso???quindi di dimensioni?
Cioè il vettore chiuso non digerito sta più in alto perchè pesa di più di uno linearizzato? E poi vi risulta che siano costituiti rispettivam da una banda e più di una banda dopo migrazione.
E poi il vettore ricombinante dovrebbe stare + in alto di tutti poichè contiene il frammento.....
Quindi ricapitolando... dovrebbe essere così??????In ordine decrescente:
-vettore ricombinante chiuso 1 banda
-vettore vuoto chiuso 1 banda
-vettore linearizzato digerito 2 o più bande
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Ciò che mi nutre .......mi distrugge.... |
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fpotpot
Utente
Città: middleofnowhere
1056 Messaggi |
 Inserito il - 20 dicembre 2006 : 12:40:19
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mah,...in teoria le bande piu' alte nn dovrebbero essere vettori che si sono aperti dopo essersi appaiati si son ricircolarizzati?
mi spiego:hai vettore di 2 kb con inserto di 500 bp.Nel gel,da che ricordo,avrai la banda corrispondente a 2.5 che e' il vettore+inserto.E una serie di altre bande:0.5 kb l'inserto che nn si e' integrato nel vettore, 2.0 kb che e' il vettore che nn si e' aperto, e bande ad alto peso molecolare,del tipo 4.0,6.0 8.0 kb che rappresentano vettori multipli che si son aperti,riappaiati con altri vettori e ricircolarizzati..no? |
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Cesca
Nuovo Arrivato
Prov.: Mantova
Città: Mantova
9 Messaggi |
Inserito il - 21 dicembre 2006 : 13:42:46
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si l'ordine di migrazione è in termini di peso... o meglio...la migrazione va inversamente al peso.. migra di più il plasmide più leggero e meno quello più pesante ( più lungo)..
poi se fai correre su gel una preparazione diDNA plasmidico che hai tentato di digerire avrai..credo..
una banda più alta con il plasmide non linearizzato e il DNA genomico (non ho mai avuto io una preparazione completamente pura da batteri ), poi una banda corrispondente alla conformazione + (destrogira credo) e una con la conformazione meno(levogira se ho detto giusto quella di prima).
hai queste due bande + e - perchè il plasmide non digerito tende a stare superavvolto.
perciò le prime tre bande che vedi sono riassumendo..la prima in alto quella del plasmide non digerito linearizzato, le due appena più in basso corrispondono invece al plasmide non digerito, e supervvolto in due possibili modi.
sotto ancora poi hai bande che corrispondono a frammenti di plasmide digerito..
se usi un solo enzima di restrizione che riconosce un solo sito di restrizione avrai solo una banda che è il tuo plasmide linearizzato..
se invece hai un inserto nel plasmide e magari sfrutti per farlo uscire due siti di riconoscimento che lo affiancano..avrai una banda che è il plasmidio linearizzato senza inserto e una che è l'inserto...credo..poi varia caso per caso a seconda di dove c'è il taglio e di quali enziomi usi.....
spero sia tutto giusto...
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mai sputare contro vento |
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Anyra
Utente Junior
Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara
212 Messaggi |
Inserito il - 21 dicembre 2006 : 16:28:10
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La migrazione di un plasmide richiuso non sottostà alle normali regole di corsa elettroforetica perchè quando in DNA non è linearizzato assume delle conformazioni tridimensionali particolari tantè che si parla nel caso di un plasmide di struttura superavvolta.
Pertanto il profilo elettroforetico varia da plasmide a plasmide ed anche, con lo stesso plasmide dall'inserto.
Può anche capitare che la forma linearizzata corra più lentamente della forma superavvolta del plasmide.
Molto spesso si riscontrano più bande perchè la forma superavvolta non è la sola presente ma vi sono anche strutture più "lasse£ che oppongono più resistenza alla migrazione e migrano più in alto. |
Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw |
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joleee80
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
24 Messaggi |
 Inserito il - 21 dicembre 2006 : 19:42:03
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Grazie a TUTTI....... |
Ciò che mi nutre .......mi distrugge.... |
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VETTORI RICOMBINANTI.....
Didattica
