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bias
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 10 maggio 2012 : 10:27:28
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ciao a tutti!
volevo un consiglio su un problema che mi si è presentato:
gli ultimi gel che ho fatto correre (di poliacrilammide ( da acrilammide bis 30%) al 7.5% e 12% ) non hanno avuto un buon esito: sembra esserci migrazione regolare per la prima metà della corsa, però dopo non mi si separano bene gli ultimi marcatori di peso molecolare...ad esempio in un 7.5% il fronte arriva al plug ma la tubulina non si separa e fuoriesce dal gel...
non so se sono stata abbastanza chiara....
non so cosa poter variare, ho già rifatto i vari tamponi...ho provato a cambiare acrilammide....
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2012 : 00:11:00
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| No infatti, non è molto chiaro... la tubulina è una banda dello standard o è nei campioni? Che standard di peso molecolare usi? Che pesi molecolari vedi nel gel da 7,5%? non è che semplicente non vedi PM più piccoli perché escono del gel? |
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0barra1
Utente Senior
Città: Paris, VIIème arrondissement
3847 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2012 : 00:21:51
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Citazione:
Messaggio inserito da GFPina
No infatti, non è molto chiaro... la tubulina è una banda dello standard o è nei campioni? Che standard di peso molecolare usi? Che pesi molecolari vedi nel gel da 7,5%? non è che semplicente non vedi PM più piccoli perché escono del gel?
Mi stavo chiedendo la stessa cosa.
Oltretutto, hai provato a cambiare cella/alimentatore? |
So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss
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bias
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2012 : 10:12:06
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allora...
intanto grazie per le vostre risposte!
provo a spiegare meglio...
facevo l'esempio della tubulina per far intendere che in un 7.5% non mi si separano le proteine con mw inferiore a 50 kDa (cosa che prima non accadeva)
e la tubulina mi serve per dimostrare che il loading sia corretto!
(come standard uso lo sm0671 della fermentas)
non pretendo di vedere una proteina da 20 kDa su un 7.5 ma almeno una da 45 si....
mentre quello al 12% che normalmente usavo per separare anche proteine da 15 kDa, non mi separa le proteine a basso peso molecolare, me le fa uscire dal gel lasciandomi come ultimo marcatore il 26kDa (nel senso che dopo quello, ho il fronte con tutte le altre proteine non separate a ridosso del plug)
non ho provato a cambiare cella semplicemente perché è di recente acquisto e già collaudata...
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2012 : 11:20:16
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| mi pare di capire che stai usando acrilammide al 30%, ma non è che usi le quantità descritte per l'acrilammide al 40% quando prepari il gel???? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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bias
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2012 : 12:14:04
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Citazione:
Messaggio inserito da Iside
mi pare di capire che stai usando acrilammide al 30%, ma non è che usi le quantità descritte per l'acrilammide al 40% quando prepari il gel????
ho sempre fatto gel in questo modo..i calcoli sono giusti!
è un problema che si è presentato adesso.. |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 11 maggio 2012 : 13:54:07
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| si ok, ma te lo dicevo perchè anche noi abbiamo sempre usato le stesse quantità ma compravamo acrilammide al 40%. una volta invece ci è arrivata quella al 30% e non ci abbiamo fatto caso...ovviamente i calcoli cambiano in questo caso. |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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corsa anomala del gel di poliacrilammide
Didattica
