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lloyd
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 11 agosto 2004 : 14:48:21
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ciao a tutti!!!
la mia non è proprio una questione tecnica, piuttosto una curiosità generale, e riguarda come generare i supertopi.
la mia idea è questa: si 'inserisce' in un plasmide il gene (o il cDNA: che differenza c'è fra l'utilizzo di uno o dell'altro?)che codifica per la molecola responsabile dell' aumento di massa muscolare del topo dietro al promotore che ne attiverà l'espressione nel muscolo: in questo modo costituisco le informazioni per la sovraproduzione della proteina.
In seguito inietto il plasmide nel nucleo di una cellula uovo che originerà un topo.
Così può funzionare, o sono completamente fuori strada?
grazie di aver letto i miei dubbi! 
stefy
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Rando
Nuovo Arrivato
Prov.: Lodi
17 Messaggi |
Inserito il - 14 agosto 2004 : 14:34:51
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welcome stefy
cercherò di non essere troppo tecnico.
Le conoscenze pregresse che ti servono per capire le metodiche di generazione di topi transgenici sono:
basi di biologia molecolare
per capire ad esempio la differenza tra gene e cDNA, [in pratica il cDNA è il mRNA *maturo* (spliced...) retrotrascritto a DNA] a differenza del "gene" di DNA il cDNA è dunque già maturato, il che ha almeno due vantaggi:
1. occupa meno spazio sul vettore
2. non deve essere maturato dall'organismo ospite (che magari ha sistemi leggermente diversi).
basi di DNA ricombinante (ingegneria genetica)
per capire come si maneggia il DNA compagnia briscola: quando dici "inserire in un plasmide" ti riferisci di fatto a qualcosa di più complesso .
basi di ingegneria cellulare
per capire come si fa a inserire il costrutto di trasformazione, plasmide o altro, in una cellula. La parola chiave che puoi cercare è "trasfezione" o "transfection"
basi di ingegneria animale
[per capire come si fa a far sì che tutto l'animale (o solo il muscolo) esprima la tua "molecola?" ovverosia la proteina necessaria per lo scopo che ti prefiggi]
Ci sono almeno tre metodiche di ingegneria animale:
1.Iniezione di DNA esogeno nella cellula uovo (TRANSGENESI STANDARD) e credo fosse la tua idea di partenza.
2.Ingegneria di cellule staminali in coltura e loro iniezione in blastocisti (GENE TARGETING)
3.Enucleazione della cellula uovo e inserzione di un nucleo di una cellula somatica (CLONAZIONE)
devi inoltre aver chiaro cosa sia la "ricombinazione omologa", che permette al tuo costrutto di integrarsi stabilmente nel genoma dell'ospite ed essere dunque sempre presente all'interno dell'organismo (un semplice plasmide episomiale si perderebbe nel corso delle duplicazioni cellulari). In questo contesto devi tenere conto del fastidioso "effetto posizione" che si può ovviare ad esempio con "sequenze insulator".
Insomma, non entrare nelle questioni tecniche è molto limitante per quella che è di fatto una *tecnologia* (la transgenesi). Si può dire che sei sulla buona strada come "comprensione del concetto", ma da qui a dire che la tua idea possa funzionare... be' per questo è necessario appunto addentrarsi nei meandri delle questioni tecniche.
Un buon testo introduttivo dove trovi un capitolo sulla generazione di animali transgenici è il
Watson, DNA Ricombinante, Zanichelli.
Ma se hai pazienza una ricerca con google, con terminologia inglese, ti fornisce un mare di materiale.
ciao
Rando
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