|
preposizione
Nuovo Arrivato
12 Messaggi |
 Inserito il - 31 maggio 2012 : 16:09:03
|
Perchè è da un pò che non riesco a fare questo clonaggio blunt?
il frammento è lacY, exciso poi fillin per renderlo blunt.
plasmide è PCR8 digerito con enzima che taglia blunt.
perchè non viene mai?
eppure un minimo di ligazione avviene, poichè con diverse combinazioni di primer si è visto esserci un minimo di segnale dell'avvenuta ligazione. (templato PCR era appunto la ligazione)
codificando lac per un trasportatore di lattosio, potrebbe essere una strategia mettere i batteri (trasfettati con la ligazione) a crescere in agar in cui al posto del glucosio aggiungo lattosio? la mia testa mi dice che così quei poveri e pochi batterini che hanno incorporato lac siano avvantaggiati perchè esprimono gli enzimi necessari ad introdurre lattosio nella cellula, rispetto invece al batterio classico che utilizzerebbe preferibilmente glucosio.
|
|
CLONAGGIO BLUNT
Didattica
