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sofia1988
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 17 giugno 2012 : 14:06:38
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Sono arrivata a calcolare deltaC / min, cioè la variazione di concentrazione di un substrato al minuto, che facciamo finta sia 5 micromoli/min.
Facciamo che nella cuvetta ho messo 20 microlitri di soluzione enzimatica su un volume totale di 1 ml, e che la concentrazione del substrato sia 2 mM e il volume immesso di 20 microlitri ( se vi servono altri dati potete inventarli, mi serve capire il procedimento di calcolo).
Come procedo per calcolare correttamente l'unità di attività( quantità di enzima necessaria per trasformare un micromole di substrato in un minuto)? Grazie
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 17 giugno 2012 : 16:26:14
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Ma non conosci la concentrazione di enzima in quegli ipotetici 20 uL di soluzione enzimatica?
La variazione di concentrazione di substrato nell'unità di tempo dipende anche da quanto enzima è presente, poi penso si tratti di fare una semplice proporzione.
Non ho mai fatto calcoli del genere però. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 17 giugno 2012 : 16:32:57
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Hai praticamente tutto il calcolo scritto, basta ragionare sulla definizione di unità enzimatica:
"un'unità enzimatica (U) è la quantità di enzima che catalizza la conversione di 1 umol di substrato al minuto"
Quindi se tu hai 5 umol/min quante U hai?
Se hai messo 20 ul di soluzione enzimatica vuol dire che le U calcolate nel passaggio precedente erano presenti in quei 20ul quindi puoi trovare la concentrazione del tuo stock di enzima in ul/ml.
Il resto dei dati è irrilevante, visto che conosci già le umol di substrato trasformate in un minuto.
Se vuoi sapere a quanti g corrisponde 1 U prendi il volume corrispondente ad 1U, lo liofilizzi e lo pesi... |
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sofia1988
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 17 giugno 2012 : 17:16:46
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| quindi se ho 5micromol/min in 20 microl di campione , vuol dire che ho 5*(1000:20)= 250 U in 1 ml, giusto? e quindi per avere 1 U devo diluire 250 volte il campione originario. Scusate se vi chiedo cose così ovvie, ma devo essere sicura di aver capito. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 17 giugno 2012 : 18:02:36
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Citazione:
quindi se ho 5micromol/min in 20 microl di campione , vuol dire che ho 5*(1000:20)= 250 U in 1 ml, giusto? e quindi per avere 1 U devo diluire 250 volte il campione originario.
Hai 250U in 1ml della tua soluzione di enzima. Se vuoi 1U prenderai 1/250ml = 4ul (d'altronde se in 20ul hai 5U in 4ul avrai 1U!). |
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