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dulcinea.88
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7 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2012 : 10:57:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di dulcinea.88 Invia a dulcinea.88 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti! ho avuto il modo di avere alcune domande dello scritto di ingegneria genetica che avrò il 2 luglio, e tra queste ce n'è una in particolare a cui non saprei proprio rispondere, qualora mi capitasse, spero mi possiate aiutare!
la domanda è questa:
come si può clonare un frammento di dna ad estremità nette, prodotto di pcr o della sintesi di cDNA? è possibile clonarlo in modo orientato? discutere


per caso c'entra qualcosa la strategia di Maniatis???

preposizione
Nuovo Arrivato



12 Messaggi

Inserito il - 24 giugno 2012 : 14:50:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di preposizione Invia a preposizione un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non so cosa sia la "strategia di maniatis"....
so che è un libro e che per giunta non ho mai letto...

comunque: no, con estremità blunt (nette o cieche) non puoi fare inserzione direzionale.
pensaci: hai un plasmide digerito con un enzima che crea estrmità blunt. e hai un frammento di pcr blunt. questo è ovvio che può inserirsi come gli pare, dritto o storto, in medesima proporzione.

comunque in generei i clonaggi si fanno digerendo il plasmide e inserendovi il frammento che viene legato con enzima T4 ligasi.

se le estremità sono blunt il clonaggio è comunque più difficile perchè è anche più facile che il plasmide si richiuda piuttosto che accetti la nuova sequenza. quindi in genere si defosforila dopo digestione blunt. pr aumentare l'efficienza di ligazione evitando che il plasmide si richiuda.
spro di esserti stata d'aiuto. in caso scrivi.
ciao
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8380 Messaggi

Inserito il - 24 giugno 2012 : 15:16:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Come fai ad avere in anticipo le domande per un esame?

Devi renderlo sticky, ci sono varie strategie, sono sicura che al corso avete affrontato questo argomento.
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